BsaI |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

BsaI 提供高保真版本 BsaI-HF®v2（NEB #R3733）。

高保真（HF）限制性内切酶在 CutSmart 缓冲液中具有 100% 活性；统一缓冲液意味着更加直接、简化的样品处理过程。HF 内切酶还会显著降低星号活性。所有 HF 内切酶均符合省时酶（Time-Saver）标准，可在 5-15 分钟内酶切底物 DNA，也可实现过夜酶切而不会造成 DNA 降解。HF 限制性内切酶在改造时便将性能作为重要指标，可在更宽的条件范围下具有完全活性，最大限度地减少非特异性酶切产物，同时为实验设计提供灵活性。

产品来源

E. coli 菌株，携带有克隆自嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）6-55（Z. Chen）的 BsaI 基因

产品类别:
Discontinued (<3 years)

  • 特性和用法

    单位定义

    一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内酶切 1 µg pXba DNA 所需的酶量。

    反应条件

    1X CutSmart® 缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X CutSmart® 缓冲液
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    100 µg/ml BSA
    (pH 7.9 @ 25°C)

    在不同缓冲液中的活性

    NEBuffer™ 1.1: 75%
    NEBuffer™ 2.1: 75%
    NEBuffer™ 3.1: 100%

    稀释兼容性

    • 稀释液 B

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    300 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    500 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

    甲基化敏感性

    dam 甲基化: 不敏感
    dcm 甲基化: 某些甲基化与酶切位点的重叠组合影响酶切
    CpG甲基化: 某些甲基化与酶切位点的重叠组合阻断酶切

  • 相关产品

    相关产品

    • dam–/dcm– E. coli 感受态细胞
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

    单独销售的组分

    • 6X 紫色凝胶上样染料
    • CutSmart® 缓冲液

  • 注意事项

    1. dcm 甲基化与酶切位点重叠阻断酶切。哺乳动物基因组 DNA 的酶切位点与某些 CpG 甲基化重叠组合阻断酶切。
    2. 50℃ 条件下活性为 100%。
    3. 在 NEBuffer r1.1 缓冲液中可能出现星号活性。
    4. 因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率，除非增加酶量。如需了解更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
    5. 甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Optimizing Restriction Endonuclease Reactions
    2. Restriction Digest Protocol
    3. Double Digest Protocol with Standard Restriction Enzymes

  • 使用指南

    • Activity at 37°C for Restriction Enzymes with Alternate Incubation Temperatures
    • Activity of Restriction Enzymes in PCR Buffers
    • Cleavage Close to the End of DNA Fragments
    • Dam and Dcm Methylases of E. coli
    • Digestion of Agarose-Embedded DNA: Info for Specific Enzymes
    • Double Digests
    • Effects of CpG Methylation on Restriction Enzyme Cleavage
    • Expanded “assembly standards” for MoClo, GoldenBraid2.0 and other modular Golden Gate Assembly methods
    • Heat Inactivation
    • NEBuffer Activity/Performance Chart with Restriction Enzymes
    • Optimizing Restriction Endonuclease Reactions
    • Restriction Endonucleases – Survival in a Reaction
    • Restriction Enzyme Diluent Buffer Compatibility
    • Restriction Enzyme Tips
    • Single Letter Codes
    • Star Activity
    • Technical Tips For Optimizing Golden Gate Assembly Reactions
    • Traditional Cloning Quick Guide

  • 应用实例

    • Breaking through the Limitations of Golden Gate Assembly

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Alphabetized List of Recognition Sequences
    • Cleavage of Supercoiled DNA
    • Compatible Cohesive Ends and Generation of New Restriction Sites
    • Dam-Dcm and CpG Methylation
    • Enzymes with Nonpalindromic Sequences
    • Frequencies of Restriction Sites
    • Isoelectric Points (pI) for Restriction Enzymes
    • Isoschizomers
    • NEB Diluent and Buffer Table
    • Time-Saver™ Qualified Enzymes
    • Type IIS Restriction Enzymes
    • Why Choose Recombinant Enzymes?

  • Web 工具

    • Competitor Cross-Reference Tool
    • DNA Sequences and Maps Tool
    • Double Digest Finder
    • Enzyme Finder
    • NEBcutter™ v3.0
    • NEBioCalculator®
    • REBASE®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Which restriction enzymes are used in Golden Gate Assembly?
    2. Which restriction enzymes are used in GoldenBraid Assembly?
    3. Which NEB restriction enzymes are supplied with Gel Loading Dye, Purple (6X)?
    4. What is the activity of the Type IIS restriction enzyme BsaI-HFv2 (NEB #R3733) in T4 DNA Ligase Buffer?
    5. Is this enzyme sensitive to dam, dcm or mammalian CpG methylation?
    6. Can Gel Loading Dye, Purple 6X (B7024) be stored in cold temperatures?

  • 问题解决指南

    • Restriction Enzyme Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    用于 Golden Gate 组装的限制性内切酶
     
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