iPSelector (Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F)) 新型人iPS/ES细胞标记抗体

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新型人iPS/ES细胞标记抗体iPSelector (Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F))                              新型人iPS/ES细胞标记抗体

iPSelector<Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F)>



iPSelector是一款使用人iPS细胞作为免疫原制备的,可识别lacto-N-fucopentaoseⅠ(LNFPⅠ)的抗体。LNFPⅠ是存在于未分化的人ES细胞、人iPS细胞表面的糖链,由于细胞分化后不再表达LNFPⅠ,因此iPSelector可作为未分化iPS/ES细胞的标记物使用。

另外,由于该产品与未分化人iPS/ES细胞结合会发挥细胞伤害作用,因此亦可用于去除未分化iPS/ES细胞。

 

※ 本产品仅供研究使用。研究以外不可使用。

※ 本产品基于立命馆大学 综合科学技术研究机构与药学部及(独)医药基础、健康、营养研究所的共同研究成果

 商品化而成。



关于人iPS/ES细胞标记抗体


迄今为止,iPS/ES细胞标记抗体(TRA-1-60、TRA-1-81、SSEA-3、SSEA-4抗体等)被广泛用于确认人iPS/ES细胞的未分化状态。然而,这些抗体大部分都是使用胚胎癌细胞(embryonal carcinoma细胞:EC细胞)作为免疫原开发的抗体,与EC细胞交叉性很强。而且,如TRA(tumor rejecton antigen)的名字所示,TRA抗体能够与多种癌细胞反应。综上所述,TRA-1-60、TRA-1-81、SSEA-3、SSEA-4抗体等并不能称为iPS/ES的特异性抗体。

iPSelector <Anti-LNFP I, Human, Mouse-Mono(R-17F)>来源于人iPS细胞作为免疫原制备的杂交瘤细胞,从中筛选出满足人iPS细胞阳性、人EC细胞阴性条件的单克隆抗体。由于本产品几乎不与EC细胞交叉反应,能够高选择性、特异性地识别未分化人iPS/ES细胞,因此可以用作新型人iPS/ES细胞标记抗体。

 


◆特点


● 特异性识别未分化人iPS/ES细胞的小鼠单克隆抗体(亚型:IgG1,克隆号:R-17F)

● 可用作识别人iPS/ES细胞的标记抗体。

● 即使是人iPS/ES细胞集落的内部,也能够均匀地染色所有人iPS / ES细胞的细胞膜。

● 与未分化人iPS/ES细胞结合时会发挥细胞伤害作用,可用于去除未分化iPS/ES细胞。

 

■ 比较iPSelector与现有标记抗体的细胞结合性


不同于目前常用的人多能干细胞标记抗体TRA-1-60,TRA-1-81等,iPSelector虽然与iPS细胞(Tic)以及ES细胞(KhES-3,H9)结合良好,但基本不与EC(2102Ep,NCR-G3)细胞结合。

细胞

本产品

TRA-1-60

TRA-1-81

SSEA-3

SSEA-4

SSEA-1*

Nanog

表位

糖脂质

硫酸角质素

硫酸角质素

球蛋白

球蛋白

LeX

转录因子

Tic (iPS)

++++

++++

++++

++++

++++

+

+++

KhES-3 (ES)

+++

++++

++++

+++

++++

+

+++

H9 (ES)

++++

++++

++++

+++

++++

+/-

+++

2102Ep (EC)

+/-

++++

++++

+++

+++

+

+++

NCR-G3 (EC)

++

++++

++++

+++

++++

++

++++

*SSEA-1小鼠ES/iPS标记抗体

 


◆应用实例

■ 蛋白印迹

iPSelector (Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F))                              新型人iPS/ES细胞标记抗体

进行5 μg细胞裂解液的蛋白印迹。


左:人iPS细胞(LNFPⅠ表达)

右:HEK293细胞(LNFPⅠ不表达)

稀释度:2,000倍(0.5 μg/mL)

二抗:Anti-Mouse IgG, Goat-Poly, HRP(KPL公司 #5220-0337)

化学发光底物:Trident plus Western HRP Substrate(GNT公司 #GTX400006)

检测:使用LuminoGraph I (ATTO)在1 min内检测

 

由于LNFPⅠ为糖链,可在蛋白印迹中观察到多条条带。这些条带都为未分化人iPS特异性条带,而在HEK293细胞中未检测出。

■ 免疫细胞染色

使用iPSelector和现存的标记抗体,染色人iPS细胞集落。在SSEA-3抗体和SSEA-4抗体中,无法染色所有人iPS细胞,但iPSelector可以均匀染色细胞集落中包含的所有人iPS细胞的细胞膜。

iPSelector (Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F))                              新型人iPS/ES细胞标记抗体

■ 流式细胞仪


将iPSelector用于流式细胞仪。

由图可知,阴性对照无法识别未分化人iPS细胞(仅二抗/下图紫色部分),但iPSelector可以识别(下图橙色部分)。

iPSelector (Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F))                              新型人iPS/ES细胞标记抗体

■ Functional Assay(对人iPS细胞的浓度依赖性细胞毒性)


iPSelector显示出较强的人iPS/ES细胞特异性细胞毒性(补体非依赖性)(左图)。通过二抗处理大幅增加了细胞毒性(右图)。

已经确认了不仅对单细胞悬液中的细胞的毒性,而且对形成细胞集落的细胞也有毒性。细胞死亡的机制是通过坏死而非凋亡。

iPSelector (Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F))                              新型人iPS/ES细胞标记抗体

左图:iPSelector与人iPS细胞株(Tic细胞)在4°C下孵育45 min后的活细胞数。iPSelector与同型的α-MBP抗体

左图:(对照)不同,拥有抗体浓度依赖性的细胞伤害作用。

右图:iPSelector浓度为1 μg/100 μL时添加二抗能进一步增强细胞毒性。添加0.1μg/100μL二抗时,90%以上的细

左图:胞被杀死。

■ iPSelector的人ES/iPS细胞伤害活性


除了Tic细胞株(人iPS细胞)以外,iPSelector对世界上常用的人iPS细胞株201B7和人ES细胞株H9以及KhES-3也显示相同的细胞伤害活性。将细胞和抗体在4℃下孵育45 min,活细胞数量随iPSelector浓度的增加而减少。

iPSelector (Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F))                              新型人iPS/ES细胞标记抗体

◆抗体信息


● 免疫原:人iPS细胞(Tic)

● 小鼠单克隆抗体(克隆号:R-17F)

● 亚型:IgG1

● 验证交叉性:人

● 表位:存在于人iPS/ES细胞膜表面的糖脂质的糖链部分lacto-N-fucopentaoseⅠ 

● (LNFPⅠ: Fuc 1-2Gal 1-3GlcNAc 1-3Gal 1-4Glc)

● 应用:免疫细胞染色、蛋白印迹、流式细胞术、去除未分化人iPS/ES细胞

● 产品规格:Protein A纯化((1mg/mL,添加50%甘油,未添加防腐剂)

 


◆参考文献


1. Kawabe, K., et al., Glycobiology, 23, 322, (2013).

2. Matsumoto, S., et al., J. Biol. Chem., 290, 20071, (2015).

3. Nakao, H., et al., Glycoconj. J., DOI 10.1007/s10719-0169-9710-2



 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
FDV-0014A iPSelector (Anti-LNFPⅠ, Human, Mouse-Mono(R-17F)) 25 μL
FDV-0014B iPSelector (Anti-LNFPⅠ, Human, Mouse-Mono(R-17F)) 100 μL