ISOGEN II

总RNA及小RNA提取试剂

    离心后的沉淀              ISOGEN II 100 mL

　　ISOGEN II是从动物组织和培养细胞中提取总RNA和小RNA的试剂。本品是含有苯酚和胍的均匀液体，根据与细胞成分的相互作用，能一步分离RNA。

　 　使用旧产品（ISOGEN和ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要进行液相分离，而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质之后，添加水， DNA、蛋白质、多糖类等沉淀（不溶化），进行离心分离后可以去除（右图）。用酒精沉淀、洗净、溶解上清液之后，能分离出高纯度的RNA。若配合ISOGENOME 使用，也能够跟ISOGEN一样从同一样本中提取DNA。

◆特点

　　•　无需使用氯仿分离RNA

　　•　相比旧产品（ISOGEN等），小RNA的提取率更高

　　•　可以把高分子RNA（＞200bases）和小RNA（＜200bases〉分离（也有不分离的方案）

　　•　混入的DNA较少，提取的RNA可以直接使用RT-PCR和定量RT-PCR

　　•　约一小时内可提取出RNA

◆用途

　　从活体组织提取RNA　等等
 

◆产品列表

运输方法

　　本品在室温下运输。产品到达后，在2~10℃条件下保存即可正常使用。

◆使用案例

操作流程

・除了本产品，根据需准备RNase free water、乙醇、4-溴甲氧.基苯异丙醇。
・可使用聚丙烯管，使用前确认是否能够承受离心强度（12K x g）及ISOGEN II（苯酚）。
・离心操作建议在4-28℃进行。

实验数据

　　1.提取的RNA的电泳

　　2.检验出miRNA
　　3.RT-PCR
　　4.RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）
　　5.RNA取量的基准
　　6.使用ISOGEN II从植物提取总RNA
　　7.使用ISOGEN II从植物提取高分子RNA及小RNA分离＜改变流程＞

Data 1：提取的RNA的电泳

　　按照ISOGEN及ISOGEN Ⅱ的操作顺序，提取RNA，进行电泳。

琼脂糖凝胶电泳
	M: RNA Ladder (编号:311-06261)   道1：ISOGEN    提取 总RNA (2μg) 道2：ISOGENⅡ 提取 总RNA (2μg) 道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (2μg) 道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.2μg)   1.2% Agarose S （甲醛变性） EtBr 染色

聚丙.烯酰胺凝胶电泳
	道1：ISOGEN     提取 总RNA (5μg) 道2：ISOGENⅡ 提取 总RNA (5μg) 道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (5μg) 道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.5μg)   12% 聚丙.烯酰胺凝胶 （Urea 变性） EtBr 染色

　　▶　道1、2中，ISOGENⅡ与ISOGEN一样，可提取全DNA。

　　▶　道3、4中，ISOGENⅡ可区分200bases以上的高分子RNA及10~200bases的小RNA。

Data 2：检验miRNA

对使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ提取的总RNA进行3D-Gene Human miRNA Oligo chip分析   　▶　ISOGEN Ⅱ比ISOGEN更能显示miRNA。

Data 3：RT-PCR

　　使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ从Hela细胞提RNA作为模板。通过RT-PCR检测出β-actin基因。同时，进行不产生RT反应的控制组实验。

PCR条件

1：模板RNA量 500ng 2：模板RNA量 100ng 3：模板RNA量 20ng M：Gene Ladder  （编号：316-06951）

　　▶　使用ISOGEN Ⅱ提取的RNA比使用ISOGEN抽提的RNA混入DNA较少。

Data 4：RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）

　　ISOGEN Ⅱ的使用指南中分离小RNA时，对使用共沉淀剂Ethachinmate（Nippon Gene 产品编号：312-01791）或者Glycogen（和光纯药工业 产品编号：077-05311）时提取到小RNA情况进行了比较。

方法   按照使用指南，从Hela细胞及小鼠肝脏回收小RNA，检测吸光度，计算小RNA的含量。将使用Ethachinmate提取到的数量看作1，在图表中列出了含量的相对值。

　　▶　使用Glycogen作为共沉淀剂回收小RNA时的回收量较多，变异较少。

Data 5：RNA取量的基准

Data 6：使用ISOGEN II从植物提取总RNA

　　从植物抽提全RNA例子 (PDF 222KB)

Data 7：使用ISOGEN II从植物抽提高分子RNA及小RNA分离＜变化流程＞

　　从植物抽提高分子RNA及小RNA离析例子 (PDF 218KB)

◆注意事项

　　•　本品是实验研究用的试剂，不能作为医药品或其他目的使用。另外，如果您对试剂的基本的知识不了解，请不要使用。

　　•　ISOGEN II是非医疗用剧毒物（苯酚制剂），请小心操作。

　　•　使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。

　　•　操作场所保持通风，以免吸入蒸汽。

　　•　如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗15分钟或以上，并及时就诊。

　　•　请按照说明书进行操作。

　　•　对于因不按照说明书操作而导致的事故，Nippon Gene不负任何责任。