高性能基因导入试剂ScreenFect™ siRNA转染试剂 -WAKO和光纯药

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    供应商: 上海金畔生物科技有限公司
    数量: 10
    英文名: ScreenFect™ siRNA
    保存条件: 2-10℃
    规格: 1 ml

    高性能基因导入试剂ScreenFect™ siRNA转染试剂 -WAKO和光纯药廉价的高性能基因导入试剂

    ScreenFectTM 通信 向HeLa细胞导入siRNA数据

     

    下面为大家介绍使用ScreenFectTMsiRNA向HeLa细胞导入siRNA数据的实验成果及逆转染(1-STEP)Protocol。

     

    ◆向HeLa细胞的逆转染例子(24孔培养板)

     

    细胞的前期培养

     

    1.     用适当的培养容器(T-75烧瓶),将HeLa细胞培养至半融合状态。

     

    配制转染试剂

     

    1.     准备两支1.5mL灭菌试管。

    2.     在其中一支试管里加入24.5μL ScreenFectTM Dilution buffer。

    3.     再往步骤2的试管里加入0.5μL的ScreenFectTMsiRNA reagent,

            使全部容量达到25μL。…溶液(A)

          (ScreenFectTMsiRNA reagent在使用前进行涡旋处理。)

    4.     在另一支试管里加入24μL ScreenFectTM Dilution buffer。

    5.     再向步骤4的试管里加入1μL的5μmol/L PIK3CB siRNA溶液(5pmol)…溶液(B)

    6.     将溶液(B)全部添加至溶液(A)的试管中。

    7.     轻敲试管,使溶液混合均匀。再用台式离心机降速处理。

    8.     在室温下孵浴5~20分钟。

     

    配制配制细胞悬浮液

     

    1.     从恒温箱里取出【细胞的前期培养】的烧瓶。

    2.     去除培养基,用PBS清洗一次。

    3.     向烧瓶里添加2mL胰蛋白酶溶液后,放入室温、5%CO2的恒温箱里培养,

            直到细胞从培养容器中脱落。

    4.     加入约5mL FBS添加培养基使反应停止。

    5.     利用移液器使细胞分散,将全部培养液转移到离心管中。

    6.     150×g离心,5分钟。

    7.     去除上清时不要去掉颗粒物。

    8.     添加5~10 mL新的培养基,利用移液器使细胞分散。

    9.     用血细胞计数板等的细胞计算器检测细胞数。

    10.  检测出细胞悬浮液的浓度后经过计算,以此配制2.0×105cells/mL的细胞悬浮液。

         (配制的细胞悬浮液量可根据实验规模进行适当地调节。)

     

    转染

     

    1.     将500μL在【配制细胞悬浮液】时配制好的细胞悬浮液添加至细胞培养板里。

    2.     将50μL在【配制转染试剂】步骤8中孵浴的DNA-lipid complex添加至细胞培养板里,

            轻摇培养板使溶液混合(也可以先往细胞培养板里加入50μL DNA-lipid complex,

            再加入500μL细胞悬浮液)。

    3.     放入CO2的恒温箱里培养24~48小时后即可进行后续实验。

     

     

    实验数据

     

      用逆向转染法和正向转染法向HeLa细胞进行PIK3CB siRNA的导入实验,通过实时定量PCR检测出PIK3CB mRNA的表达量。将定量结果得出的敲减效率,与原来用其他公司的产品进行实验得出的敲减效率进行比较,结果显示,ScreenFectTMsiRNA拥有高于其他公司产品抑制目的基因表达的效率。

     

    【逆向转染(1-STEP)】

    高性能基因导入试剂ScreenFect™ siRNA转染试剂 -WAKO和光纯药

     

     

    【正向转染(2-STEP)】

    高性能基因导入试剂ScreenFect™ siRNA转染试剂 -WAKO和光纯药

     

     

    ◆产品列表

     

    产品编号

    产品名称

    规格

    包装

    299-75001

    ScreenFectTMsiRNA转染试剂

    ScreenFectTMsiRNA

     基因研究用

    0.2mL

    295-75003

    1mL

    293-75004

    1mL×5

     

    温馨提示:不可用于临床治疗。

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