重组赖氨酰肽链内切酶rLys-C

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  • 货号: RLYS-C0401
    保存条件: -15℃以下
    供应商: 上海金畔生物科技有限公司·中国
    英文名: rLys-C
    数量: 10
    规格: 20 ug

    重组赖氨酰肽链内切酶rLys-C

     

     

    ◆概述

     

    赖氨酸内肽酶最早从土壤细菌无色杆菌Achromobacter lyticus中分离得到,能够特异性识别与切割肽链中Lys羧基端肽键,常被用于蛋白测序及Lys-X化合物的酶催化合成。

    艾美迪选用Achromobacter lyticus来源的,克服大肠杆菌重组表达技术难题进行制备。本品最适pH 9.0~9.5,等电点为pH 6.9~7.0;最适反应温度30~37℃,50℃以上稳定性下降。在适宜温度下,该酶稳定性良好,在4 mol/L尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6 hr后,生物活性未发生降低。可广泛用于蛋白组学分析,蛋白、抗体类药物质量检测,多肽、蛋白类产品制备工艺中。

     

     

    ◆特性

     

    ● 高比活性,高特异性,可消化难以酶切的位点,空间构象复杂或疏水性较强的蛋白(如膜蛋白)同样适用

    ● 活性稳定,尿素、C2H3N等变性剂耐受能力强

    ● 批量化生产,连续批次质量稳定,批间差小

    ● 高纯度,重组表达避免了可能存在的杂酶残留(e.g. Arg-C,Lys-N等)

     

    ◆来源

     

    重组 E. coli 菌株,其克隆有来自的无色杆菌(A. lyticus蛋白酶I基因。

     

     

    ◆酶活定义

     

    0.2 mol/L pH 9.0Tris-HCl缓冲中,温度为37±2℃的条件下, 1 min催化底物AC-Lys-PNA生成1 μmol PNA所需的酶量为一个活性单位(AU)。

     

     

    纯度

     

    将 rLys-C已DTT 还原处理后, 还原电泳显示纯度>99%

     

    重组赖氨酰肽链内切酶rLys-C

     

    ◆使用方法

     

    本品为冻干粉,使用前先使用超纯水或25 mmol/L Tris-HCl,pH 8.0~8.5溶解。

     

     

    ◆应用实例

     

    rLys-C酶切重组人门冬胰岛素原(Pro-Insulin-Aspart)

     

     

    底物Pro-Insulin-Aspart分子量约为7 kDa,含有3个赖氨酸(K),采用 Lys-C 酶切的理论肽段示意图如下:

     

    重组赖氨酰肽链内切酶rLys-C

     

     

    酶切条件酶与底物的质量比为 1:10000,在50 mM Tris-HCl,pH 8.5中37℃酶切16 小时。

     

    重组赖氨酰肽链内切酶rLys-C

     

    峰 A:酶切前肽段 Pro-Insulin-Aspart

    峰 B:酶切后 B链+C肽+A链(去引导肽)

    峰 C:酶切后B链+A链(去引导肽和C肽)

     

     

     

    名称 

    RT 

    Area 

    Area% 

    质谱量 

    酶切位点 

    对应肽段

    Pro-Insulin-Aspart
        未酶切对照 

    10.45

    155.045

    100%

    7096.94

    酶切前

    以IMD-RLys-C-酶切产物
    (酶:底物1:10000)

    11.57

    201.6

    100%

    5724.54

    B链+A链

    以其他公司重组Lys-C酶产物
    (酶:底物1:10000)

    10.49

    146.9

    61.78%

    7096.94

    酶切前

    10.62

    81.5

    34.29%

    6006.84

    ① 

    B链+C肽+A链

     

    艾美迪 的 RLys-C 酶切产物为切除引导肽和 C 肽的门冬胰岛素前体,酶切位点①②③均酶切完全。

    而其他公司产品仅部分切开酶切位点①,切除效率仅为34.29%,酶切位点②③均未被酶切,未能得到序列正确的门冬胰岛素前体。

     

     

    ◆与其他公司产品对比

     

     

    底物 

    酶切位点对比 

    艾美迪 

    其他公司重组Lys-C

    重组人门冬胰岛素原

    (Pro-Insulin Aspart)

    分子量约为7 kDa,含有3个K

    ①PK

    ++ 

    +

    ②DK

    ++ 

    ③GK

    ++ 

    重组人普通胰岛素原

    (Pro-Insulin)

    分子量约为7 kDa,含有3个K

    ①PK 

    ++ 

    +

    ②PK 

    ++ 

    +

    ②AK 

    ++ 

    +

    PJ-10S小肽
    分子量约为1 kDa,含有3个K

    ①DK 

    ++ 

    +

     

    相同底物浓度的酶切条件下艾美迪的 rLys-C 的酶切效率显著高于其他品牌同类产品。以生成的肽段 YDDDDK 计算,艾美迪的rLys-C 的酶切率比其他品牌同类产品高约9倍;以生成的肽段 RGWK 计算,艾美迪的rLys-C的酶切效率比其他品牌同类产品高约8.6倍。

     

     

    ◆产品信息

     

     

    产品编号

    产品名称

    活性单位

    规格

    RLYS-C0401

    重组赖氨酰肽链内切酶
        rLys-C

    3.0 AU/mg

    20 μg

    ​RLYS-C0403

    重组赖氨酰肽链内切酶
        rLys-C

    3.0 AU/mg

    1 mg

     

     

     

    ◆相关产品

     

     

    产品编号

    产品名称

    活性单位

    规格

    RME0101

    重组赖氨酰肽链内切酶/重组胰蛋白酶混合装
        Lys-C + Trypsin

    3.0 AU/mg

    20 μg

    RME0102

    混合型重组内切酶/重组胰蛋白酶混合装
        Lys-C + Trypsin

    3.0 AU/mg

    20 μg x

     

     

    产品的详情请查看详细单页:重组赖氨酰肽链内切酶rLys-C

     

    温馨提示:不可用于临床治疗。