StemSure® Serum Repl日本和光Wako 干细胞 ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-细胞培养

日本和光Wako 干细胞 ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品
本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子,会导致干细胞分化。使用本产品代替血清,可在ES和iPS细胞培养的同时,保持他们的未分化状态,达到稳定培养。

StemSure® Serum Replacement Update!!

干细胞 ES细胞iPS细胞培养用血清代替品

 

StemSure® Serum Repl日本和光Wako 干细胞 ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-细胞培养

 

  本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子,会导致干细胞分化。使用本产品代替血清,可在ESiPS细胞培养的同时,保持他们的未分化状态,达到稳定培养。

  本产品不含剧毒物质,将其作为普通物质处理。

  使用本产品配制培养基培养的小鼠ES细胞,可用于制备嵌合体小鼠,并确认其种系传递.

 

 

◆特点

 

  ●可用于嵌合体小鼠制备,并确认其种系传递

  ●作为血清替代品,用于小鼠ES细胞人IPS细胞培养。

  ●不含剧毒物质

 

 

◆实验项目

 

  ●克隆形成实验(使用小鼠ES细胞D3)

  碱性磷酸酶检验实验(使用小鼠ES细胞D3

  ●无菌实验

  ●pH

  ●渗透压

  ●内毒素

  ●支原体实验

 

 

 

◆嵌合体小鼠的制备与种系传递 Update!!

 

  将组装HaloTag® cDNA的目标载体导入小鼠ES细胞,用含有StemSure®  Serum ReplacementSSR)的培养基培养。确认载体导入小鼠ES细胞后,将其注入至ICR小鼠的胚盘胞,并移植至ICR小鼠的子宫。得到的嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配,获得F1小鼠。

 

 

 

《嵌合体小鼠》

 

  收集嵌合体小鼠的血液,用TRITC(四甲基若丹明异硫氰酸盐)对HaloTag® 蛋白质染色。发现小鼠ES细胞源的HaloTag® 的血液被染色,可确认为嵌合化。

 

 

 

 

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F1小鼠》

 

  F1小鼠的血液发现HaloTag® 存在,可确认SSR培养基培养的ES细胞嵌合小鼠能够正常存活

 

 

 

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<数据提供  筑波大学生命科学动物资源中心三輪佳宏老师>

HaloTag® Promega公司的注册商标。

 

 

iPS细胞201B7的培养

克隆形态与ALP染色

 

已确认可用StemSure®Serum ReplacementSSR)培养人iPS细胞201B7株。ALP染色呈阳性。

 

 

StemSure® Serum Repl日本和光Wako 干细胞 ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-细胞培养

 

<培养基组成>
 D-MEM/Ham's F-12 + 20% SSR + 2mmol/l L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5ng/ml bFGF

 

 

《未分化标记的发现》

 

  使用StemSure®Serum ReplacementSSR)培养的人iPS细胞201B7株,确认各种未分化标记(Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81)呈阳性

 

 

 

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◆小鼠ES细胞D3的培养

 

《细胞形态与ALP染色》

  

  使用StemSure®Serum ReplacementSSR)培养小鼠ES细胞D3,能观察到小鼠ES细胞群特有的光泽,ALP染色呈阳性。

 

StemSure&#174; Serum Repl日本和光Wako 干细胞 ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-细胞培养

 

《细胞增殖曲线》

  用不同培养基培养小鼠ES细胞D3进行14继代培养,比较细胞增殖。

  如下图所示StemSure® 系列与A公司有同等的性能。

 

 

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<StemSure® 系列培养基组成>
 StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/lStemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

 (使用胶原包被的12孔板)

 

《细胞群倍加数*

  使用不同培养基对小鼠ES细胞D3进行继代培养,检查培养天数与细胞群倍加数的关系。

  下图显示StemSure® 系列与A公司产品(含血清)的细胞群倍加数相同。

 

 

 

*细胞群倍加数 cell population doubling level,缩写PDL,指从培养开始至现在细胞群的倍增次数。

 

<培养基组成>
 StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

 (使用胶原包被的12孔板)

 

 

《未分化标记的检测》

 

  使用StemSure® 系列对小鼠ES细胞D3进行5代继代培养,各种未分化标记(Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1)呈阳性。

 

 

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<培养基组成>
 StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

 

《畸形瘤的形成》

 

  StemSure® 系列对小鼠ES细胞D3进行继代培养。对免疫不全小鼠的皮下注射培养后细胞。在形成皮下畸形瘤,其内部检测出神经组织(外胚叶源)、软骨组织(中胚叶源)、管腔结构纤毛上皮(内胚叶源)。

 

 

 

StemSure&#174; Serum Repl日本和光Wako 干细胞 ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品-细胞培养

<培养基組成>
 StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

 

 

干细胞培养

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
197-16775  StemSure® Serum Replacement 500ml 细胞培养用
197-16275 StemSure® D-MEM(High Glucose)with Phenol  500ml 细胞培养用
198-15781 StemSure® 10mmol/l 2-Mercaptoethanol Solution  100ml 细胞培养用
195-15791 StemSure® 50mmol/l Monothioglycerol Solution  100ml 细胞培养用
190-15805 StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution 500ml 细胞培养用
199-16051 StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution 106units 细胞培养用
195-16053 StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution 106units 细胞培养用
195-16031 StemSure® Freezing Medium 100ml 細胞培養用