产品信息

 
Endo D 又称糖苷内切酶 D，是重组酶，可从壳二糖核心结构之间切除寡甘露糖 N-连接糖链，无论糖支链有无延伸。糖苷内切酶 D 携带有几丁质结合域（CBD）标签，易于从反应中去除。该酶以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。

产品来源

糖苷内切酶 D 的截短基因克隆自肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae），携带几丁质结合域（CBD），在 E. coli 中融合表达

特异性

详细特异性

图 1：糖苷内切酶 D 的详细特异性

产品类别:

Endoglycosidases Products,

Proteome Analysis Products

应用:

Expression Systems,

Glycan Sequencing,

Proteomics,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0742S     4       Endo D P0742SVIAL 4 1 x 0.03 ml 50,000 units/ml   DTT B0706SVIAL -20 1 x 1 ml 0.4 M   GlycoBuffer 2 B3704SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
  P0742L     4       Endo D P0742LVIAL 4 1 x 0.15 ml 50,000 units/ml   DTT B0706SVIAL -20 1 x 1 ml 0.4 M   GlycoBuffer 2 B3704SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 10 μl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内从 10 μg 经糖苷酶切割的胎球蛋白（具有三个甘露糖核心结构）中去除超过 95% 的碳水化合物所需的酶量。

  反应条件

  1X GlycoBuffer 2
  Incubate at 37°C

  1X GlycoBuffer 2
  50 mM Sodium Phosphate
  (pH 7.5 @ 25°C)

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  65°C for 10 minutes

  分子量

  实际: 140000 Da

  单位活性检测条件

  使用 1X DTT，将 10 μg 经糖苷酶切割的胎球蛋白（具有三个甘露糖核心结构）在 95℃ 条件下变性 3 分钟。在 1X GlycoBuffer 2 中添加两倍稀释的糖苷内切酶 D，37℃ 条件下温育 1 小时。通过 SDS-PAGE 观察反应产物的分离情况。

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  • 几丁质磁珠
  • 6 孔磁性分离架
  • 12 孔磁性分离架
  • Endo S
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• 注意事项

  1. 非变性糖蛋白去糖基化，可能需要更长的温育时间和更高浓度的酶。
  2. 糖苷内切酶 D 不宜与含 SDS 和 DTT 的糖蛋白变性缓冲液同时使用，因为 SDS 会抑制糖苷内切酶 D 的活性；与其它糖苷内切酶不同的是，NP-40 不会抵消 SDS 的抑制作用。
  3. 从去糖基化反应中去除糖苷内切酶 D，几丁质磁珠用量可以随糖苷内切酶 D 等比增加。
  4. 几丁质磁珠能结合 0.4 μg/μl 带 CBD 标签的蛋白。
  5. 50 μl 几丁质悬浊液可去除 1-5 μl（50-250 unit）糖苷内切酶 D

• 参考文献

  1. McLeod, E., Shi, S. and Magnelli, P., New England Biolabs, Inc., unpublished results. Unpublished observation

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Reaction Conditions for Endo D (P0742)
  2. Endo D Removal Magnetic Chitin Bead Protocol (P0742)

工具 & 资源

• 选择指南

  • Endoglycosidase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What is the tag on Endo D?
  2. What is the difference between PNGase F, Endo S and Endo D?
  3. What is a typical reaction protocol for Endo D?
  4. Will SDS inhibit Endo D?
  5. How do I eliminate Endo D from a reaction?
  6. What is the binding capacity of the Magnetic Chitin Beads used to remove Endo D?
  7. Is Endo D compatible with downstream analysis such as HPLC and Mass Spectrometry?
  8. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
  9. Can Endo D cleave glycoproteins under native conditions?