产品信息

细菌肝素酶 III 可以切割氨基己醣与艾杜糖醛酸或葡萄糖醛酸残基之间的糖苷键。在 6-硫酸存在条件下，细菌肝素酶 III 具有活性。

产品来源

该酶克隆自埃氏拟杆菌（Bacteroides Eggerthii），在 E. coli 中表达。

产品类别:

Heparinases Products

应用:

Analysis of Heparin/HS

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  P0737S     -80       Bacteroides Heparinase III P0737SVIAL -80 1 x 0.02 ml 700 units/ml   Bacteroides Heparinase Reaction Buffer B0735SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
  P0737L     -80       Bacteroides Heparinase III P0737LVIAL -80 1 x 0.05 ml 700 units/ml   Bacteroides Heparinase Reaction Buffer B0735SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位指在 100 μl 总反应体系中，pH 7.0，30℃ 条件下，每分钟能从硫酸乙酰肝素中释放 1.0 μmol 不饱和寡糖所需的酶量。

  反应条件

  1X 细菌肝素酶反应缓冲液
  Incubate at 30°C

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  100 mM NaCl
  5 mM CaCl₂
  1 mM EDTA
  pH 7.5 @ 25°C

  热失活

  100°C for 1 minute

  分子量

  实际: 75 kDa

  单位活性检测条件

  在 100 μl 反应体系中，将两倍稀释的细菌肝素酶 III 与 1 mg/ml 猪黏膜硫酸乙酰肝素（1X 细菌肝素酶反应缓冲液）进行温育。在 30℃ 条件下温育反应预混液。通过 232 nm 处的实时紫外光谱检测，确定不饱和寡糖的释放情况。

• 相关产品

  相关产品

  • 细菌肝素酶 I
  • 细菌肝素酶 II

• 注意事项

  1. 避免反复冻融。
  2. 常规反应条件：
     1. 在 100 μl 总反应体系中，将 10 μl 1 mg/ml 硫酸肝素、10 μl 细菌肝素反应缓冲液和水混合。
     2. 添加 1 μl 细菌肝素酶 III。
     3. 在 30℃ 条件下，将反应体系温育 1 – 24 小时（监测 232 nm 处的吸光度，确定发生部分或完全消化）。

     对于特定底物，必须根据实际经验确定最佳温育时间和酶浓度。

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. What are Bacteroides Heparinase Enzymes?
  2. What is the difference between Bacteroides Heparinase I, II and III?
  3. Can Bacteroides Heparinase I, II, and III be used together in one digest?
  4. What is the optimal pH range for Bacteroides Heparinase III?
  5. Is Bacteroides Heparinase III activated by Calcium?
  6. What is the formulation of the Heparinase Reaction Buffer?

• 实验技巧

  肝素酶 III 切割硫酸化程度较低的 HS 链。

  细菌肝素酶 III 在 pH 7.0 – 8.0 之间的活性最大。

  细菌肝素酶 III 具有钙依赖性，在 1.5 – 5 mM CaCl2 条件下具有最大活性。

  细菌肝素酶 III 可以使用肝素酶反应缓冲液，与细菌肝素酶 I 和 II 进行双重消化。