产品信息

SNAP-tag 蛋白标记体系能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。SNAP-tag 是一种基于人 O⁶-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase，hAGT）的蛋白。SNAP-tag 的底物通过苄基与鸟嘌呤或氯嘧啶基团偶联荧光基团、生物素或微珠。在标记反应中，底物的苄基部分被替换，与 SNAP-tag 形成共价结合。

该体系包括两个步骤：亚克隆并表达目标蛋白为 SNAP-tag 融合蛋白，以及使用所选的 SNAP-tag 底物标记融合蛋白。在 SNAP-tag 质粒的产品说明中描述了 SNAP-tag 融合蛋白的表达。有关利用 SNAP-tag 底物标记融合蛋白的信息，请参阅操作说明。

产品类别:

Building Blocks Products,

SNAP-tag Substrates Products ,

Protein Labeling Products

应用:

Protein Labeling Snap Clip,

Cell Imaging

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  S9151S     -20       BG-GLA-NHS S9151SVIAL -20 1 x 2 mg Not Applicable

• 特性和用法

  反应条件

  将 BG-GLA-NHS 偶联到蛋白
  NHS 与蛋白质的偶联通常使用过量的 NHS 酯进行。根据蛋白质中赖氨酸残基的数量，可能需要在标记反应完成之前终止标记反应，以避免损伤或展开蛋白质。典型的偶联包括使 NHS 酯与蛋白表面暴露的伯胺发生反应，形成酰胺键。反应条件为： pH 7-9（常规条件 pH 8.3），温度范围 4–37℃，温育时间从 30 分钟至过夜。必须注意避免使用含有伯胺的缓冲液，如 Tris 或铵离子。

  BG-GLA-NHS 与含胺化合物的偶联
  常规反应中含有等摩尔量的 NHS 酯、待偶联的胺和三乙胺在 DMF 中于 30℃条件下过夜。纯化方式取决于所使用的标签。用高效液相色谱法（HPLC）和硅胶色谱法均已获得了较好的结果

• 注意事项

  1. BG-GLA-NHS 以冻干粉形式提供，并在氩气下包装。SNAP-tag 构建模块底物干粉应在 -20℃条件下贮存。
  2. BG-GLA-NHS 可溶于无水 DMF 或 DMSO。选择与最终用途相兼容的溶剂体积。通过涡旋并短暂离心去除未溶解的固体。
  3. NHS 酯在潮湿的环境中容易水解。实验设计应最大限度地利用 BG-GLA-NHS。建议不要将未使用的 BG-GLA-NHS 溶解于 DMF 或 DMSO 中贮存。如果有特殊情况，建议在 -20℃条件下贮存最短时间。

• 参考文献

  1. Howland, S.W. et al. (2008). J. Immunother. 31, 607-619.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Labeling SNAP-tag Fusion Proteins with BG-substrates (S9151)
  2. Reaction Conditions for Chemical Coupling (S9151)

工具 & 资源

• 选择指南

  • Building Blocks
  • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Cellular Imaging and Analysis FAQs

• 问题解决指南

  • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide