产品信息

SNAP-tag 蛋白标记体系能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。SNAP-tag 是一种基于哺乳动物 O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（AGT）的小蛋白。SNAP-tag 的底物是苄基嘌呤和苄基氯嘧啶的衍生物。在标记反应中，底物取代苄基部分与 SNAP-tag 形成共价结合。

该体系包括两个步骤：亚克隆并表达目标蛋白为 SNAP-tag 融合蛋白，以及使用所选的 SNAP-tag 底物标记融合蛋白。SNAP-tag 质粒随附的说明书中描述了 SNAP-tag 融合蛋白的表达。SNAP-Cell 底物随附的说明书中描述了如何使用 SNAP-Cell 底物进行 SNAP-tag 融合蛋白标记。有关在使用 SNAP-tag 底物标记融合蛋白时，使用 SNAP-Cell® 阻断剂的信息如下所述。

图 1：SNAP-Cell 阻断剂分子结构（MW 338.2 g/mol）

产品类别:

Blocking Agents Products,

SNAP-tag Substrates Products ,

Protein Labeling Products

应用:

SNAP Cell,

Pulse Chase,

In vivo Imaging,

Receptor Internalization,

Protein Localization,

Protein Labeling Snap Clip

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  S9106S     -20       SNAP-Cell® Block S9106SVIAL -20 1 x 100 nmol Not Applicable

• 特性和用法

  需要但不提供的材料

  • 表达 SNAP-tag 融合蛋白的细胞
  • 组织培养材料和培养基
  • 转染试剂
  • 荧光显微镜及适用的滤光装置
  • DMSO

• 注意事项

  1. 请注意，细胞中的蛋白会不断更新和再合成。在阻断细胞内所有现有的 SNAP-tag 融合蛋白后，同时会合成新的 SNAP-tag 融合蛋白分子，此蛋白分子将在与荧光 SNAP-tag 底物一起温育时被标记。这会给人一种阻断剂无效的错觉。为了最大限度地减少蛋白合成和蛋白运输的影响，必须使用放线菌酮处理细胞，并且与荧光 SNAP-tag 底物的温育必须在 4℃ 条件下进行。
  2. 贮存条件：SNAP-Cell 阻断剂应贮存在 -20℃（长期贮存）或 4℃（短期贮存）条件下。如果妥善贮存在 -20℃ 条件下，SNAP-Cell 阻断剂在干燥状态下至少可保持三年稳定；溶解在 DMSO 中时，至少可保持三个月稳定。
  3. 如需问题解决指南，请酌情参阅 SNAP-Cell 产品随附的说明书。

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Cellular Labeling (S9106)
  2. Labeling of Proteins in vitro (S9106)

• 应用实例

  • AppNote_SNAP_Based_Pulse_Labeling_for_Analysis_of_Protein_Turnover_in_Living_Cells

工具 & 资源

• 选择指南

  • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Cellular Imaging and Analysis FAQs

• 问题解决指南

  • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide

• 实验技巧

  添加 DMSO 后，使用移液枪吸打混匀至少 10-20 次，然后剧烈涡旋处理至少 1 分钟整，以确保底物完全溶解。

  在完全培养基中稀释底物后，使用移液枪吸打混匀至少 10 次，有助于降低背景。

  增加底物浓度及/或反应时间通常会导致背景较高，并且不一定会增加信噪比（SNR）。