10-beta E. coli 电转感受态细胞 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

NEB 10-beta E. coli 电转感受态细胞专为实现高效的电转化而优化。这些细胞非常适合 DNA 建库和所有克隆应用。

重点

  • DH10B™ 衍生菌株
  • 可克隆包括 BAC 和 cosmid 在内的大质粒
  • 可高效转化真核生物来源的甲基化 DNA，或来自 PCR、cDNA 和其它来源的非甲基化 DNA
  • 消除了非特异性核酸内切酶 I（endA1）的活性，以获得最高质量的质粒制备
  • 适用于蓝白斑筛选，通过 β-半乳糖苷酶基因（Φ80ΔlacZM15）的 α-互补实现
  • 减少克隆 DNA 的重组（recA）
  • 抗 T1 噬菌体（fhuA）
  • K-12 菌株
  • 无动物来源

基因型

Δ(ara-leu) 7697 araD139  fhuA ΔlacX74 galK16 galE15 e14-  Φ80dlacZΔM15  recA1 relA1 endA1 nupG  rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) 

产品类别:
Cloning Competent Cell Strains Products

应用:
Transformation

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C3020K     -80    
        NEB® 10-beta Electrocompetent E. coli C3020KVIAL -80 6 x 0.1 ml Not Applicable
        NEB® 10-beta/Stable Outgrowth Medium B9035SVIAL 4 1 x 25 ml Not Applicable
        pUC19 Vector N3041AVIAL -20 1 x 0.025 ml 50 pg/µl

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Chloramphenicol 33 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

    抗生素耐药性

    • str

  • 优势和特性

    Features

    电转技巧：

    1. 电转比色皿和微型离心管应在冰上预冷。
    2. 电转感受态细胞应该在冰上解冻，并通过小心轻弹管子使其悬浮。
    3. 将 DNA 加入到细胞后，就可以立即开始电转。无需将 DNA 与细胞一同温育。建议 DNA 溶液的最大体积为 2.5 µl。若添加大量 DNA，会降低转化效率。
    4. 盐和蛋白质等污染物可降低电转效率。理想情况下，用于转化的 DNA 应进行纯化并重悬于水或 TE 中。由于存在连接酶和盐，连接混合物的转化效率不到对照 pUC19 质粒的十分之一。如果直接使用，应将连接反应体系在 65℃ 条件下热失活 20 分钟，然后稀释 10 倍。为获得最佳结果，建议使用离心柱（NEB #T1030）纯化连接反应产物。
    5. 电穿孔条件受到比色皿和电穿孔仪的影响。如果使用的电穿孔仪或比色皿未在操作说明中指定，您可能需要优化电穿孔条件。建议使用 1 mm 间隙的比色皿（例如 BTX 610/613 型和 Bio-Rad #165-2089）。2 mm 间隙的比色皿需要更高的电压。
    6. 高浓度的盐或气泡可能会引起电弧。
    7. 在电穿孔后须立即向细胞中加入复苏培养基。延误一分钟会让效率降低为原来的三分之一。
    8. 冷而干燥的筛选平板会导致转化效率较低。将筛选平板在 37℃ 条件下预热 1 小时。使用 37℃ 预热的复苏培养基可让效率提高约 20%。
    9. 将未使用的细胞在干冰/乙醇浴中重新冷冻 5 分钟，然后在 -80℃ 条件下贮存。不要使用液氮。反复冻融会导致转化效率降低。

    应用特性

    10-beta E. coli 电转感受态细胞 |
    DNA 对转化效率和菌落产量的影响：在 DNA 起始量高达 10 ng 时电转效率仍然非常高，更高的 DNA 浓度则会降低转化效率。随着 puc19 DNA 起始量增加至 1 μg，总菌落数持续增加。

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    • NEB® 10-beta E. coli 感受态细胞（高效级）
    • 电转连接酶®
    • m0269-phi29-dna-polymerase
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

    单独销售的组分

    • NEB® 10-beta/Stable Outgrowth 培养基

  • 注意事项

    1. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 条件下贮存。-20℃ 条件下贮存会显著降低转化效率。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Electroporation Protocol (C3020)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Electroporation Tips
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes
    • Traditional Cloning Quick Guide

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Product Comparison

  • Web 工具

    • Competitor Cross-Reference Tool
    • NEBcloner®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How should I calculate the Electrotransformation efficiency (C3020)?
    2. What are the strain properties (C3020)?
    3. What type of competent cells are suitable for transformation of DNA constructs created using Gibson Assembly?
    4. What type of competent cells are suitable for transformation of DNA constructs created using NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix?
    5. How should I store SOC Outgrowth Medium? The SOC I received with my competent cells recommends storage at either room temperature or 4°C, however, when I purchase it as a stand alone product, it recommends storing it at 4°C. Which is better?
    6. How should I store the NEB 10-beta/Stable Outgrowth Medium?
    7. How should fragments be prepared for assembly using NEBuilder HiFi?