5-alpha E. coli 感受态细胞（亚克隆效级） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

适用于亚克隆效级转化的 E. coli 化学感受态细胞， 如质粒转化或常规亚克隆 （例如将 1 kb 的片段插入 2 kb 的载体中）。对大多数其它克隆实验而言， 这些细胞的转化效率还不够高。 对于这些实验，我们推荐使用 NEB® 5-alpha E. coli 感受态细胞（高效级）（NEB #C2987）， 其转化效率高出 1,000 倍。

重点

  • 去除了非特异性核酸内切酶 I（endA1）的活性，以获得最高质量的质粒制备
  • 可高效转化 PCR、cDNA 或其它来源的非甲基化 DNA（hsdR）
  • 减少克隆 DNA 的重组（recA1）
  • 抗 T1 噬菌体（fhuA2）
  • 适用于蓝白斑筛选，通过 β-半乳糖苷酶基因的 α-互补实现
  • K12 菌株
  • DH5α™ 衍生菌株
  • 无动物来源

基因型

fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 Φ80Δ(lacZ)M15 gyrA96 recA1 relA1 endA1 thi-1 hsdR17

产品类别:
Cloning Competent Cell Strains Products

应用:
Transformation

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C2988J     -80    
        NEB® 5-alpha Competent E. coli (Subcloning Efficiency) C2988JVIAL -80 6 x 0.4 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Chloramphenicol 33 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Streptomycin 25 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

  • 优势和特性

    Features

    转化操作流程的优化
    解冻：细胞最好在冰上解冻，并在试管中最后一点冰消失后立即加入 DNA。细胞也可以用手解冻，但温度超过 0℃ 会降低转化效率。

    将细胞与 DNA 置于冰上温育：为达到最高转化效率，应将细胞和 DNA 放在冰上一起温育 30 分钟。该步骤每缩短 10 分钟，转化效率预计降低一半。

    热激：热激步骤的温度和时间都很重要，并且与转化体积和器皿息息相关。使用随附的转化管，在 42℃ 条件下热激 30 秒为最佳。

    生长复苏：在 37℃ 条件下培养 1 小时，最有利于细胞复苏和抗生素耐药性的表达。该步骤每缩短 15 分钟，转化效率预计降低一半。SOC 培养基的转化效率是 LB 培养基的 2 倍；与不进行摇动的温育相比，温育时摇动或旋转试管可让转化效率提高 1 倍。

    涂板：使用温热或冷、湿润或干燥的筛选平板，不会显著影响转化效率。不过，温热且干燥的筛选板更便于涂板，并且能够最快地形成菌落。

    应用特性

    DNA 纯度对转化效率和菌落产量的影响：5-alpha E. coli 感受态细胞（亚克隆效级） |
    用小提质粒 DNA 对 NEB 5-alpha E.coli 感受态细胞（亚克隆效级）进行转化，单次反应得到的菌落总数并未显著减少。使用 10 ng-1,000 ng 纯化后的超螺旋 pUC19 或通过市售小提试剂盒纯化的 pUC19 转化时，菌落总数随 DNA 浓度的增加而增加。
    5-alpha E. coli 感受态细胞（亚克隆效级） |
    *理想情况下，用于转化的 DNA 应进行纯化并重悬于水或 TE 中。然而，最多只能使用10 µl 的连接混合液 DNA 直接转化感受态细胞，而转化效率也将降低为原来的一半。当需要最大限度地增加总转化子数量时，应进行一步纯化，可以是离心柱纯化（NEB #T1030），或使用酚/氯仿抽提和乙醇沉淀。
    热激时间对 NEB 5-alpha E.coli 感受态细胞转化效率的影响：5-alpha E. coli 感受态细胞（亚克隆效级） |
    按照所提供的高效级转化操作流程，用 100 pg pUC19 对照 DNA 转化 50 μl 感受态细胞，热激时间的变化范围为 0 至 80 秒。
    DNA 温育时间对 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞转化效率的影响：5-alpha E. coli 感受态细胞（亚克隆效级） |
    按照所提供的高效级转化操作流程，用 100 pg pUC19 对照 DNA 转化 50 μl 感受态细胞，DNA 温育时间的变化范围为 0 至 40 分钟。
    细胞复苏培养基对转化效率的影响：5-alpha E. coli 感受态细胞（亚克隆效级） |
    按照所提供的高效级转化操作流程，用 100 pg pUC19 对照 DNA 转化 50 μl NEB 5-alpha E.coli 感受态细胞，不同反应之间使用的复苏培养基不同。NEB SOC Outgrowth 培养基的转化效率最高。

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    单独销售的组分

    • SOC Outgrowth 培养基

  • 注意事项

    1. NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞（亚克隆效级）不随附 SOC Outgrowth 培养基或 pUC19 对照 DNA 。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. 5 Minute Transformation Protocol (C2988)
    2. Subcloning Competent E.coli Transformation Protocol (C2988)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Chemical Transformation Tips
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes

  • 应用实例

    • Enhancing Transformation Efficiency

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Product Comparison

  • Web 工具

    • Competitor Cross-Reference Tool
    • NEBcloner®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can LB medium be used instead of SOC in the outgrowth step (C2988)?
    2. Can NEB 5-alpha competent E.coli (Subcloning Efficiency) (NEB #C2988J) be used for large fragment cloning?
    3. What is the difference between NEB #C2988J and NEB #C2987H?
    4. What is the optimal heat shock time for this strain (NEB #C2988J)?
    5. How long should I incubate cells on ice after DNA has been added (NEB #C2988J)?
    6. How should I calculate the transformation efficiency of NEB 5-alpha Competent E. coli (Subcloning Efficiency)?
    7. What are the solutions/recipes that I need for transforming NEB 5-alpha Competent E. coli (Subcloning Efficiency)?
    8. What are the strain properties of NEB 5-alpha Competent E. coli (Subcloning Efficiency)?
    9. Can I store competent cells at -20°C instead of -80°C?
    10. Which kind of transformation tubes should be used?
    11. What volume of DNA can be added into competent cells?
    12. What is the shelf life for this strain (NEB #C2988J)?
    13. Are NEB’s competent cells compatible with the “Mix & Go” protocol?
    14. How should fragments be prepared for assembly using NEBuilder HiFi?