Stable E. coli 感受态细胞（高效级） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

化学感受态 E. coli 细胞适用于高效转化及含重复片段的质粒提取。

重点

  • 逆转录病毒/慢病毒载体基因克隆的推荐宿主菌株
  • 正向重复序列和反向重复序列克隆的推荐宿株
  • 减少克隆 DNA 的重组（recA1）
  • 可高效转化真核生物来源的甲基化 DNA，或来自 PCR、cDNA 和其它来源 [mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)] 的非甲基化 DNA
  • 去除了非特异性核酸内切酶 I（endA1）的活性，以获得最高质量的质粒制备
  • 抗 T1 噬菌体（fhuA）
  • 适用于能够进行 α-互补的载体的蓝白斑筛选

基因型

F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)/∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14-  Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)

产品类别:
Cloning Competent Cell Strains Products

应用:
High-throughput cloning and automation solutions,
Transformation

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C3040H     -80    
        NEB® 10-beta/Stable Outgrowth Medium B9035SVIAL 4 1 x 25 ml Not Applicable
        pUC19 Vector N3041AVIAL -20 1 x 0.025 ml 50 pg/µl
        NEB® Stable Competent E. coli (High Efficiency) C3040HVIAL -80 20 x 0.05 ml Not Applicable
    • C3040I     -80    
        NEB® 10-beta/Stable Outgrowth Medium B9035SVIAL 4 1 x 25 ml Not Applicable
        pUC19 Vector N3041AVIAL -20 1 x 0.025 ml 50 pg/µl
        NEB® Stable Competent E. coli (High Efficiency) C3040IVIAL -80 6 x 0.2 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Chloramphenicol 33 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

    抗生素耐药性

    • 四环素
    • 链霉素

  • 优势和特性

    Features

    • 由于 endA 突变，可用于制备高质量质粒
    • 抗噬菌体 T1（fhuA）
    • 高性价比
    • 无动物来源

    应用特性

    • 克隆不稳定的插入片段
    • 分离和增殖逆转录病毒/慢病毒克隆
    • 兼容 NEBuilder HiFi DNA 组装、Gibson 组装以及连接反应

    NEB Stable 可用于含重复 DNA 片段的质粒提取：

    Stable E. coli 感受态细胞（高效级） |
    质粒 pUC-5xREP 包含 5 个 32 bp 重复序列，因此在重组菌株中不稳定。A) NEB Stable 感受态细胞或 B) Stbl3 感受态细胞使用 2 µl 包含 2.2 ng（0.00125 pmol）pUC19 载体和约 1 ng（0.0028 pmol）5xREP 插入片段的 pUC-5xREP Gibson 组装反应转化。将转化产物液涂布在含有 100 µg/ml 氨苄青霉素的 LB 板上，30℃温育过夜。次日，使用 M13/pUC 多克隆位点区引物做菌落 PCR，分析 5xREP 插入片段的稳定性。图 1 显示了 33 个独立菌落的分析结果。正确的全长扩增子为 623 bp。
    NEB Stable E. coli 感受态细胞高转化效率带来巨大优势
    Stable E. coli 感受态细胞（高效级） | 使用不同厂家的产品，按照所提供的产品说明书操作，比较转化效率。图中数值取自三次平行实验的平均值。
    细胞复苏培养基对转化效率的影响
    Stable E. coli 感受态细胞（高效级） |
    按照所提供的高效级转化操作流程，用 100 pg pUC19 对照 DNA 转化 50 μl NEB Stable E. coli 感受态细胞，仅复苏培养基不同。NEB 10-beta/Stable Outgrowth 培养基的转化效率最高。

  • 相关产品

    单独销售的组分

    • NEB® 10-beta/Stable Outgrowth 培养基

  • 注意事项

    1. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 条件下贮存。-20℃ 条件下贮存会显著降低转化效率。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。
    2. 注意：本产品含危险物质 DMSO。处理前请先查看 MSDS。
    3. 在添加 Outgrowth 培养基后，用 AmpR 质粒的转化反应无需扩增培养期。使用氨苄青霉素以外的其它抗生素进行质粒筛选，在涂板筛选培养基前，需要在 30℃ 条件下扩增培养 60 分钟。30℃ 或 37℃ 都可用于平板温育，但建议在 30℃ 条件下温育，因为某些质粒在高温下可能不稳定。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. 5 Minute Transformation Protocol for NEB® Stable Competent E. coli (C3040H/C3040I)
    2. High Efficiency Transformation for NEB® Stable Competent E. coli (C3040H)
    3. Protocol for cloning DNA containing repeat elements (C3040)
    4. High Efficiency Transformation Protocol (C3040I)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Chemical Transformation Tips
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes
    • Restriction of Foreign DNA by E. coli K-12

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Product Comparison
    • Competent Cell Selection Guide

  • Web 工具

    • Competitor Cross-Reference Tool
    • NEBcloner®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Which competent cell strains are compatible with Gateway® Cloning?
    2. What are the strain properties (C3040)?
    3. What is the shelf-life for this strain?
    4. Which strain of Competent E.coli should I use for general cloning?
    5. Are NEB Stable Competent E. coli cells suitable for transformation of large plasmids and large NEBuilder HiFi, Gibson Assembly or Golden Gate Assembly products?
    6. How should I calculate the transformation efficiency (C3040)?
    7. What is the optimal heat shock for this strain? (C3040)
    8. What volume of DNA can be added into competent cells?
    9. Is NEB Stable suitable for larger plasmid transformations?
    10. Is NEB Stable a substitute for Stbl2 or Stbl3?
    11. What type of competent cells are suitable for transformation of DNA constructs created using NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix?
    12. How should I store the NEB 10-beta/Stable Outgrowth Medium?
    13. Do NEB Stable Competent E.coli require an outgrowth recovery period after transformation with AmpR plasmids?
    14. How should fragments be prepared for assembly using NEBuilder HiFi?