T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

BL21 源增强型大肠杆菌（E. coli）化学感受态细胞，适合高效级转化和蛋白表达。

重点

  • 无动物来源产品
  • 通过溶菌酶对 T7 RNA 聚合酶进行调控，从而允许克隆潜在的毒性基因
  • LysY 作为特殊的 T7 溶菌酶，因缺少酰胺酶活性，从而降低细胞在诱导过程中的溶菌现象
  • 溶菌酶质粒的维持无需抗生素筛选
  • BL21 源增强型菌株
  • 不受限于 DNA 是否甲基化（McrA–、McrBC–、EcoBr–m–、Mrr–）
  • Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
  • 以溶菌酶进行表达控制
  • 在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶，无 λ 前噬菌体
  • 无需 Cam
  • 菌落快速培养
  • miniF 上的溶菌酶增强稳定性
  • 抗噬菌体 T1（fhuA2）Cam、Nit
  • B 菌株

基因型

MiniF lysY (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS) endA1 ∆(mcrC-mrr)114::IS10

产品类别:
T7 Expression,
E. coli Protein Expression Strains Products,
Protein Expression Products,

E. coli Expression Strains Products

应用:
T7 Expression,
Toxic Protein Expression,
Expression of Difficult Proteins,

Peptide Ligation,
Protein Expression in E. Coli,

Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • C3010I     -80    
        T7 Express lysY Competent E. coli (High Efficiency) C3010IVIAL -80 6 x 0.2 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    Antibiotic for Plasmid Selection

    用于质粒筛选的抗生素 使用浓度
    Ampicillin 100 µg/ml
    Carbenicillin 100 µg/ml
    Kanamycin 30 µg/ml
    Streptomycin 25 µg/ml
    Tetracycline 15 µg/ml

    货运单

    • Ships on dry ice

    抗生素耐药性

    • nit
    • cam

  • 优势和特性

    Features

    • T7 表达
    • 蛋白酶缺失
    • 更好地降低本底表达

    应用特性

    毒性哺乳动物克隆转化大肠杆菌（E. coli）宿主T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将 T7 表达质粒和含有编码毒性哺乳动物蛋白的基因的相同质粒转化到每个宿主中。相对转化效率的比较表明，T7 表达宿主提供了转化潜在毒性克隆所需的控制水平。不能用 BL21（DE3）转化毒性克隆。
    T7 调控无毒蛋白在大肠杆菌（E. coli）宿主中的表达T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将含有编码大肠杆菌（E. coli）蛋白的基因的 T7 表达质粒转化到每个宿主中，培养至 0.6 OD 并诱导 3 小时。未诱导（-）和诱导（+）细胞可溶性提取物的比较显示了对 T7 表达宿主中本底表达的卓越控制，并同时保持高水平的诱导表达。
    热激时间对 T7 表达 lysY E.coli 感受态细胞转化效率的影响T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将 50 μl 感受态细胞与 100 pg pUC19 对照 DNA 按照所提供的高效级转化操作流程进行转化，仅热激时间为 0 至 80 秒不等。
    DNA 孵育时间对 T7 表达 lysY E.coli 感受态细胞转化效率的影响T7 表达 lysY E. coli 感受态细胞（高效级） |
    将 50 μl 感受态细胞与 100 pg pUC19 对照 DNA 按照所提供的高效级转化操作流程进行转化，仅 DNA 孵育时间为 0 至 40 分钟不等。

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    单独销售的组分

    • SOC Outgrowth 培养基

  • 注意事项

    1. 维持 miniF 质粒无需抗生素。如果添加氯霉素，则终浓度为 10 µg/ml。
    2. 注意：本产品含有害物质 DMSO。处理前请先查看 MSDS。
    3. 贮存和处理：感受态细胞应在 -80℃ 下贮存。在 -20℃ 贮存会导致转化效率显著降低。当细胞温度高于 -80℃ 时，即使不融化，细胞也会失去效率。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. High Efficiency Transformation Protocol (C3010)
    2. 5 Minute Transformation Protocol (C3010)
    3. Protocol for Expression Using T7 Express lysY (C3010)

  • 使用指南

    • Additional E. coli Strain Genotypes
    • Competent E. coli Genome Sequences Tool
    • Genetic Markers
    • McrA, McrBC and EcoKI Strain Phenotypes

  • 应用实例

    • Protein Expression with T7 Express Strains

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Characteristics of Select E.coli Strains
    • Competent Cell Product Comparison
    • Competent Cell Selection Guide

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Why are there no colonies or no growth in liquid culture (C3010)?
    2. Why is there no protein visible on gel or no activity (C3010)?
    3. Why is induced protein insoluble (C3010)?
    4. What are the solutions/recipes (C3010)?
    5. What are the strain properties (C3010)?
    6. Can I store competent cells at -20°C instead of -80°C?
    7. What is the difference between NEB #C3010H and NEB #C3010I?
    8. What is the optimal heat shock time for this strain (NEB #C3010H and NEB #C3010I)?
    9. How long should I incubate cells on ice after DNA has been added (NEB #C3010H and NEB #C3010I)?
    10. Is T7 Express lysY (NEB #C3010H and NEB #C3010I) compatible with auto-induction procedures?
    11. Which kind of transformation tubes should be used?
    12. What volume of DNA can be added into competent cells?
    13. What s the shelf life for this strain (NEB #C3010H and NEB #C3010I)?
    14. Are NEB’s competent cells compatible with the “Mix & Go” protocol?
    15. Is antibiotic selection necessary to maintain the MiniF-lysY plasmid?
    16. Is T7 expression subject to catabolite repression in NEB T7 Express or SHuffle strains?