pTXB1 载体 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

IMPACT 引用文献

pTXB1 是 IMPACT™ 试剂盒（NEB #E6901）中提供的大肠杆菌表达载体（1,2）。该载体设计用于以框内插入方式，将目标基因插入 Mxe 内含肽/几丁质结合域（27 kDa）上游的多克隆位点区（2,3,4,5）。融合蛋白与几丁质磁珠结合，硫醇诱导的内含肽切割活性会释放目标蛋白。推荐将 pTXB 载体用于内含肽介导的蛋白连接和 C 端标记（2）。此双链载体的长度为 6,706 bp。

pTXB1 载体 |

DNASU 和 Addgene 是质粒克隆和收集的资源中心，也可能有所帮助。

产品类别:
IMPACT System,
Bacterial E. coli Protein Expression Products,
DNA Plasmids & Substrates Products,

Chitin Purification (CBD-tag),
Protein Purification Products,

Protein Expression Products

应用:
Protein Expression in E. Coli,
Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • N6707S     -20    
        pTXB1 Vector N6707SVIAL -20 1 x 0.05 ml 0.2 mg/ml

  • 特性和用法

    亲和标签

    几丁质结合域（CBD）

  • 优势和特性

    Features

    • 多克隆位点区的 NdeI 位点包含用于翻译起始的 ATG 序列。用粗体表示唯一位点。SalI 位点不是唯一的。
    • SapI 位点应该用于克隆插入片段的 3´ 末端。使用 SapI 位点可以将目标蛋白克隆到与内含肽相近的位置，最后切割产生的目标蛋白在 C 端不存在任何额外氨基酸。
    • 融合基因的表达受 IPTG 诱导型 T7 启动子的调控（6）。
    • 具有 ColE1 复制起点的 pBR322 衍生载体。
    • 由于源于噬菌体 M13 的 DNA 复制起点，能够通过辅助噬菌体（M13KO7 辅助噬菌体，NEB #N0315）对携带质粒的细胞进行超染，从而产生单链 DNA。
    • 氨苄青霉素抗性。
    • 也可使用其它 IMPACT 载体将目标基因融合到内含肽的 N 端或 C 端。切割反应可由硫醇试剂或温度/pH 变化诱导。
    • 伴随载体 pTXB3（NEB #N6708）包含一个替代 NdeI 的 NcoI 位点。
    • 兼容多种大肠杆菌宿主菌株：T7 表达 E. coli 感受态细胞（高效级）（NEB #C2566）或 BL21(DE3) E. coli 感受态细胞（NEB #C2527）及其衍生菌株。

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    • IMPACT™ Kit
    • pTYB21 载体
    • pTWIN1 载体

  • 参考文献

    1. Chong, S., Mersha, F.B., Comb, D.G., Scott, M.E., Landry, D., Vence, L.M., Perler, F.B., Benner, J., Kucera, R.B., Hirvonen, C.A., Pelletier, J.J., Paulus, H. and Xu, M.-Q. (1997). Single-column purification of free recombinant proteins using a self-cleavableaffinity tag derived from a protein splicing element. Gene. 192, 271-281.
    2. Evans, T.C., Benner, J. and Xu, M.-Q. (1998). Semisynthesis of cytotoxic proteins using a modified protein splicing element. Protein Sci.. 7, 2256-2264.
    3. Southworth, M.W., Amaya, K., Evans, J., T.C., Xu, M.-Q. and Perler, F.B. (1999). Purification of proteins fused to either the amino or carboxy terminus of the Mycobacterium xenopi gyrase A intein.. BioTechniques. 27, 110-120.
    4. Watanabe, T., Ito, Y., Yamada, T., Hashimoto, M., Sekine, S. and Tanaka, H. (1994). The role of the C-terminal domain and type III domains of chitinase A1 from Bacillus circulans WL-12 in chitin degradation. J. Bacteriol.. 176, 4465-4472.
    5. Telenti, A., Southworth, M., Alcaide, F., Daugelat, S., Jacobs, W.R. Jr. and Perler, F.B. (1997). The Mycobacterium xenopi GyrA protein splicing element: Characterization of a minimal intein. J. Bacteriol.. 179, 6378-6382.
    6. Dubendorff, J.W. and Studier, F.W. (1991). Controlling basal expression in an inducible T7 expression system by blocking the target T7 promoter with lac repressor. J. Mol. Biol.. 219, 45-59.

操作说明、说明书 & 用法

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE6901

  • 应用实例

    • Intein-Mediated Protein Ligation IPL and Labeling with the IMPACT™ Kit

工具 & 资源

  • 选择指南

    • IMPACT™ Vectors and Applications

  • Web 工具

    • DNA Sequences and Maps Tool

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What vectors are included in the IMPACT kit?
    2. What is the DNA sequence of this product?