PURExpress® 二硫键增强剂 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

PURExpress® 二硫键增强剂（PDBE）是一种专有的蛋白质和缓冲液混合物，当 PURExpress 体系合成的目的蛋白具有较多二硫键时，该产品的专属蛋白质和缓冲液成分能帮助其正确折叠。在合成反应开始时加入 PURExpress二硫键增强剂，能够协助半胱氨酸硫醇的氧化，并纠正硫醇的错误氧化。从而提高可溶性蛋白及具有功能活性蛋白的产量。

图 1： PURExpress® 二硫键增强剂 |
PURExpress 二硫键增强剂（PDBE）可促进活性 vtPA 的正确折叠，其是组织纤溶酶原激活物的截短版本，有 9 个二硫化物键，其中 8 个是非连续的。

（A.）反应按照 PURExpress 体系说明建立，以vtPA DNA 为模板。37℃温育 2 小时后，取 5 μl 反应液进行活性检测，在 1 小时内监测发光底物的剪切反应。（B.）各取 2.5 µl 反应液，用 SDS-PAGE 电泳分离，使用考马斯亮蓝染色。vtPA 目的蛋白用红色箭头标记。

添加 PDBE 产生活性蛋白。通过对靶标的功能活性检测，发现活性差异是由二硫键的折叠所致，而不是由于 PURExpress 体系合成蛋白产量导致的差异。

图 2： PURExpress® 二硫键增强剂 |
PURExpress 二硫键增强剂经过优化，适合用于 PURExpress 体系，但也适用于其它供应商的基于 S30 裂解的 IVTT 试剂盒。根据厂商说明书来建立反应体系：用等量的模板 DNA 编码组织纤溶酶原活化剂的截短版本（9 个二硫键，其中 8 个为非连续）。温育两小时后，各取 5 µl 进行活性测定，并监测切割 1 小时的显色底物。
图 3： PURExpress® 二硫键增强剂 |
PURExpress 二硫键增强剂促进活性 Gaussia 荧光素酶（GLuc）的正确折叠，该酶含有 5 个可能二硫键。用等量的模板 DNA 编码 GLuc，按照 PURExpress 体系说明书建立反应体系。37℃温育 2 小时后，每个反应取一式三份（2.5 µl/份），与 50 µl GLuc 底物溶液温育，在 4 秒计数时段后记录相对发光强度。
产品类别:
NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System,
PURExpress,
Cell-Free Protein Expression Products,

Protein Expression Products

应用:
NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System,
PURExpress,
Cell-Free Protein Expression,

Expression of Difficult Proteins,
Disulfide-bonded Protein Expression,

Protein Expression

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E6820S     -20    
        PURExpress Disulfide Bond Enhancer 1 P6821AVIAL -20 1 x 0.05 ml 25 X
        Enhancer 2 B6822AVIAL -20 1 x 0.05 ml 25 X

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  • 注意事项

    1. PURExpress 二硫键增强剂经过优化，能够与 NEB PURExpress 体系（NEB #E6800、E3313）一起使用。然而，它与其它供应商的细菌 S30 裂解物 IVTT 体系兼容（图 2）。由于其它体系的产品剂型不同，因此与 PDBE 相关的所有指南、操作说明和常见问题解答均仅适用于 PURExpress 体系。

  • 参考文献

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操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. PURExpress Disulfide Bond Enhancer (E6820)

  • 应用实例

    • AppNote_Use_of_PURExpress _and_PDBE_to_Express_Active_Proteins_that_can_be_Expressed_in vivo_in_Shuffle_Competent_Cells
    • NEBExpress® Cell-free E. coli Protein Synthesis System

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Is the PURExpress® In Vitro Protein Synthesis Kit capable of dealing with disulfide bonds? If not, can you recommend something else to use post synthesis?

  • 实验技巧

    可能需要对溶液 1 和溶液 2 进行滴定测试，以获得最佳的蛋白折叠。每种溶液从 1 ul 的量开始。
    可与 S30 裂解物和 PURExpress 一起使用。