5´ DNA 腺苷化试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

5´ DNA 腺苷化试剂盒操作简便高效，用于产生 5´-腺苷化 DNA。试剂盒经过优化，无论序列有无 3´ 端终止子，都能生成腺苷化的 DNA。通常 5´ DNA 腺苷化试剂盒能将 95% 的 pDNA 转化为 AppDNA(1)。高效的转化，使得反应无需进行胶回收提纯步骤，因此可提高总产量。

本产品提供以下试剂或组分：

NEB #

名称

组分货号

储存温度

数量

浓度

E2610S

-20

Mth RNA Ligase	M2611AVIAL	-20	1 x 0.02 ml	50 µM
5′ DNA Adenylation Reaction Buffer	B2610SVIAL	-20	1 x 1 ml	10 X
Adenosine 5′ Triphosphate	N0757AVIAL	-20	1 x 0.1 ml	1 mM

E2610L

-20

Mth RNA Ligase	M2611AAVIAL	-20	1 x 0.1 ml	50 µM
5′ DNA Adenylation Reaction Buffer	B2610SVIAL	-20	1 x 1 ml	10 X
Adenosine 5′ Triphosphate	N0757AVIAL	-20	1 x 0.1 ml	1 mM

优势和特性
Features
- 一步反应即可完成定量腺苷化
- 比目前其它化学和酶学方法更简便
- 省去了大量纯化反应产物的需要
- 65℃ 的反应温度减少了二级结构
- 可轻松从 pmol 扩展到 μmol
应用特性

酶法对单链 DNA 接头进行 5´-腺苷化，用于二代测序。
注意事项
1. 腺苷化反应可放大至 6 倍而不损失效率，此时终浓度为每微升 30 pmol 寡核苷酸和 30 pmol Mth RNA 连接酶。寡核苷酸可以通过苯酚抽提和乙醇沉淀或柱色谱法纯化，以去除蛋白质和 ATP。
2. 对于具有未受保护的 3´ 末端的底物，将 ATP 浓度增加至 0.5 mM，以防止环化和多联体化。
3. 该酶周转率较低，需要用到约等量摩尔浓度的酶和寡核苷酸底物。
4. 在二代测序 cDNA 文库构建实验中，预腺苷化 DNA 接头可用于 RNA 的 3´ 末端连接（3,4）。
参考文献
1. Zhelkovsky, A.M. and McReynolds, L.A. (2011). Nucl. Acids Res. 39(17): e117.
2. Torchia, C., Takagi, Y. and Ho, C.K. (2008). Nucleic Acids Res. 36, 6218-6227.
3. Hafner, M. et al. (2008). Methods. 44, 3-12.
4. Vigneault, F., Sismour, A.M. and Church, G.M. (2008). Nature Methods. 5, 777-779.

操作说明
1. Protocol for Oligonucleotide Adenylation (NEB #E2610)
2. Protocol for one-step adenylation and ligation of 5´p DNA and 3’OH RNA using Mth RNA Ligase (NEB #M2611) and Thermostable 5’ App DNA/RNA Ligase (NEB #M0319)