microRNA Marker |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

microRNA Marker 由三种合成的单链 RNA 寡核苷酸组成，长度分别为 17、21 和 25 个碱基，都具有游离的 5´ 末端（即没有 5´ 磷酸基团）。这些寡核苷酸可以用作变性聚丙烯酰胺凝胶和 Northern blot 中的分子量 Marker。使用 SYBR-Gold 而不是溴化乙锭染色，可以获得更好的染色效果（图 1）。

Marker 的三种寡核苷酸含有相同的核心序列，因此可以用相同的探针进行杂交检测。microRNA Marker 条带的序列如下：

25-mer：5´AGAGCAGUGGCUGGUUGAGAUUUAA 3´
21-mer：5´AGCAGUGGCUGGUUGAGAUUU 3´
17-mer：5´CAGUGGCUGGUUGAGAU 3´

注意：用粗体表示的序列是三种寡核苷酸共有的序列。

随附与 Marker 序列互补的 21-mer DNA 寡核苷酸。此寡核苷酸在 3´ 末端由生物素标记，并且有一个游离的 5´ 末端，因此它也可以用 γ-32P-ATP 和 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）（NEB# M0201）进行标记。该寡核苷酸探针的序列如下：

5´AAATCTCAACCAGCCACTGCT 3´-Biotin

microRNA Marker 以即用型溶液（含有 4 M 尿素和 0.04% 橙黄 G）形式提供。microRNA Marker 探针重悬于水。


microRNA Marker |
Figure 1: Lane A: 60 ng of microRNA Marker(5 µl) was loaded on a 12% denaturing polyacrylamide-urea gel which was stained with SYBR Gold (Molecular Probes) for 5 minutes and photographed on a transilluminator. Lane B: 0.2 µg of the Low Range ssRNA Marker (NEB #N0364).
产品类别:
RNA Markers & Ladders Products,
RNA Markers and Ladders

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • N2102S     -20    
        microRNA Marker N2102SVIAL -20 1 x 0.5 ml 12 ng/µl
        MicroRNA Marker Probe (21-mer) S1328SVIAL -20 1 x 0.5 ml 20 ng/µl

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    • T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）

  • 注意事项

    1. microRNA Marker 以即用型变性溶液形式提供。95℃ 加热 3 到 5 分钟使其变性，再置于冰上。取 5 – 10 µl 上样，变性凝胶用 SYBR Gold 染色。在 Northern blot 中，少于 1 µl（12 ng）的量就足以通过杂交进行检测。

      橙黄 G 上样缓冲液的迁移速度比最小的条带快，大约可迁移到几个核苷酸的位置。

    2. 寡核苷酸探针用法：随附的生物素标记探针 DNA 寡核苷酸可以用 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）（NEB #M0201）和放射性 γ-32P-ATP 进行标记。操作流程如下：

      1. 在无菌微量离心管中混合以下组分：

         寡核苷酸探针：1 – 5 µl
         10X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液：2.0 µl
         γ-32P-ATP（5 µCi/µl）：1 – 2 µl
         T4 多核苷酸激酶：1 µl
         无菌 dH20：X µl
         总体积：20 µl 

      2. 37℃ 温育 30 分钟。

      3. 使用 G-25 离心柱纯化标记探针。

  • 参考文献

    1. Sambrook, J. and Russel, D.W. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd Ed.). 7.1-7.56.

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I use the microRNA Marker on a non-denaturing gel?
    2. Should I denature the microRNA Marker before loading on my gel?
    3. What is the difference between the siRNA marker and the microRNA marker (NEB #N2101S)?
    4. Can I use EtBr for staining the microRNA Marker after gel electrophoresis?
    5. Should I load more of the microRNA Marker so I can get better visibility of the bands after staining the gel with EtBr?