ShortCut® RNase III |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

与随附的含锰反应缓冲液一起使用时，ShortCut® RNase III 能将较长的双链 RNA 切割成一组大小不同的由 18–25 bp 组成的小片段干扰 RNA（siRNA），更适合用于哺乳动物细胞中 RNA 干扰实验（1–3）。用 1.5 单位（1 µl）的 ShortCut RNase III 能够将 1 µg 的双链 RNA 完全切割成适用于哺乳动物细胞中 RNA 干扰实验的 siRNA。

ShortCut® RNase III |
双链 RNA 的 ShortCut RNase III 酶切：（A）在 50 µl 反应体系中，37℃ 条件下，不同单位数量的 ShortCut RNase III 与 2 µg 500 bp 双链 RNA 温育 20 分钟。消化产物通过 20% TBE 聚丙烯酰胺电泳进行分析。Marker 泳道包含 21 bp siRNA Marker 和 100 bp DNA Ladder（NEB #N3231）的混合物。（B）用 ShortCut RNase III 消化双链 RNA 片段（1 kb 和 175 bp）。消化产物通过 20% TBE 聚丙烯酰胺电泳进行分析。
ShortCut® RNase III |
在 COS-7 细胞中进行 GFP 沉默实验：在无 GFP siRNA（对照）或共转染了使用 ShortCut RNAi 试剂盒制备的 30 ng（4 nM）GFP siRNA 条件下，24 孔板中 COS-7 细胞表达 GFP 的质粒的情况。转染 48 小时后对细胞进行成像。

产品来源

E. coli 菌株，克隆表达融合有麦芽糖结合蛋白（MBP）的 E. coli RNase III 基因（rnc）。

产品类别:
RNases

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0245S     -20    
        ShortCut® RNase III M0245SVIAL -20 1 x 0.1 ml 2,000 units/ml
        ShortCut Reaction Buffer B0245SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        10X EDTA B0255AVIAL -20 1 x 1 ml 500 mM
        MnCl2 B0786AVIAL -20 1 x 1 ml 200 mM
        Glycogen RNase-Free B1564SVIAL -20 1 x 0.05 ml 10 mg/ml
    • M0245L     -20    
        ShortCut® RNase III M0245LVIAL -20 1 x 0.5 ml 2,000 units/ml
        ShortCut Reaction Buffer B0245SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        10X EDTA B0255AVIAL -20 1 x 1 ml 500 mM
        MnCl2 B0786AVIAL -20 1 x 1 ml 200 mM
        Glycogen RNase-Free B1564SVIAL -20 1 x 0.05 ml 10 mg/ml

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 50 µl 的总反应体系中，37℃ 条件下，20 分钟将 1 µg 双链 RNA 切割成 siRNA 所需的酶量。

    反应条件

    1X ShortCut 反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X ShortCut 反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    1 mM DTT
    50 mM NaCl
    (pH 7.5 @ 25°C)

    使用浓度

    1X

    贮存溶液

    500 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    0.5 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 8 @ 25°C

    热失活

    否

    单位活性检测条件

    1 单位指在 50 μl 的总反应体系中，37℃ 条件下，20 分钟将 1 μg 双链 RNA 切割成 siRNA 所需的酶量。

  • 优势和特性

    Features

    • 制备适合任何基因靶点的有效 siRNA
    • 异源 siRNA 可确保靶基因沉默
    • 从 DNA 模板到转染只需要一天
    • 避免了使用合成 siRNA 需反复摸索实验条件的问题

    应用特性

    • 基因沉默
    • 靶标验证

  • 相关产品

    相关产品

    • 6 孔磁性分离架
    • 链霉亲和素磁珠

  • 参考文献

    1. Morlighem, J.E. et al. (2007). Biotechniques. 42, 599-606.
    2. Yang, D. et al. (2002). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 9942-9947.
    3. Calegari, F. et al. (2002). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 14236-14240.
    4. Donze, O. and Picard, D. (2002). Nucleic Acids Res. 30, e46.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. ShortCut RNase III Digestion Protocol (NEB #M0245)
    2. Purification of siRNA by Ethanol Precipitation from ShortCut digests (NEB #M0245)
    3. Transfection Guidelines for ShortCut® RNase III (NEB #M0245)