耐热 RNase H |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

耐热 RNase H 是一种在高温下起作用的核糖核酸内切酶，能特异性识别并切割 RNA:DNA 杂交体中 RNA 序列的磷酸二酯键，同时保持 DNA 序列完整。此外，耐热 RNase H 不会降解单链或双链 RNA 或 DNA。虽然耐热 RNase H 和 E. coli RNase H 同源物都表现出相同的核糖核酸内切酶特性，但耐热酶在更高的温度下表现出活性，且最佳活性在 65℃ 以上。这些特性使它们能够应用于更高温度。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有编码极端嗜热菌嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）RNase H 的密码子优化质粒。

产品类别:
RNases,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
Transcription-Mediated and NASBA Amplification,
cDNA Synthesis,
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0523S     -20    
        Thermostable RNase H M0523SVIAL -20 1 x 0.05 ml 5,000 units/ml
        RNase H Reaction Buffer B0297SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指 50 µl 反应体系中，50℃ 条件下，20 分钟从 40 pmol 荧光标记的 25 bp RNA:DNA 杂交体中水解得到 1 nmol 核糖核苷酸所需的酶量。

    反应条件

    1X RNase H 反应缓冲液
    Incubate at ≥50°C

    1X RNase H 反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    75 mM KCl
    3 mM MgCl2
    10 mM DTT
    (pH 8.3 @ 25°C)

    贮存溶液

    50 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    0.1% Triton® X-100
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    否

  • 优势和特性

    应用特性

    • 高精度 RNA 结构图谱制备和 RNA 位点特异性切割
    • 杂交到 oligo(dT) 上的 mRNA poly(A) 尾的去除
    • cDNA 第二链合成中去除 mRNA
    • 等温扩增实验中的组份

  • 注意事项

    1. 注意：RNAse H 反应缓冲液包含 MgCl2。目标 RNA:DNA 杂交体和其它单链 RNA（总 RNA）在高温下使用耐热 RNase H 时，建议控制反应时间和温度，以降低金属介导的单链 RNA 的降解。
    2. 耐热 RNase H 可以通过添加蛋白酶 K 或过量的 EDTA 来失活。
    3. 最佳反应温度 > 65℃，最高 95℃。耐热 RNase H 在 65℃ 时的活性是 37℃ 时的 3 到 4 倍。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Cleavage of an RNA strand in an RNA-DNA hybrid with Thermostable RNase H (NEB #M0523)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. When I thaw the 10X RNase H Reaction Buffer, I see a white precipitate.  What is it and what should I do about it?
    2. What is the difference between E. coli RNase H (NEB #M0297) and Thermostable RNase H (NEB #M0523)
    3. Which side of the RNA base does Thermostable RNase H cut
    4. What is the optimal reaction temperature for Thermostable RNase H
    5. Is Thermostable RNase H active in other buffers
    6. Does Thermostable RNase H cut single-stranded RNA
    7. Does Thermostable RNase H require co-factors for activity
    8. Can Thermostable RNase H be inactivated by heat
    9. What applications are Thermostable RNase H suitable for