β-琼脂糖酶 I |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

β-琼脂糖酶切割琼脂糖亚单位或未置换的新琼脂乙糖 [3,6-酐-a-L-吡喃型半乳糖基-1-3-d-半乳糖] 生成新琼脂糖-寡糖（1）。

产品来源

分离自大肠杆菌菌株，该菌株携带有编码 β-琼脂糖酶 I 基因的质粒。

产品类别:
Other Products,
DNA Gel Extraction Products

应用:
Nucleic Acid Purification

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0392S     -20    
        β-Agarase I M0392SVIAL -20 1 x 0.1 ml 1,000 units/ml
        β-Agarase I Reaction Buffer B0392SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
    • M0392L     -20    
        β-Agarase I M0392LVIAL -20 1 x 0.5 ml 1,000 units/ml
        β-Agarase I Reaction Buffer B0392SVIAL -20 4 x 1.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 42℃ 条件下，1 小时消化 200 μl 低熔点琼脂糖或 NuSieve 琼脂糖生成可溶性新琼脂-寡糖所需的酶量。

    反应条件

    1X β-琼脂糖酶 I 反应缓冲液
    Incubate at 42°C

    1X β-琼脂糖酶 I 反应缓冲液
    10 mM Bis-Tris-HCl
    1 mM EDTA
    (pH 6.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    50 mM Bis-Tris-HCl
    1 mM EDTA
    50% Glycerol
    pH 6.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 15 minutes

  • 优势和特性

    应用特性

    • β-琼脂糖酶 I 消化琼脂糖，形成不能再成胶的碳水化合物分子，同时释放所俘获的 DNA。β-琼脂糖酶 I 可用于从凝胶中纯化大片段（> 50 kb）和小片段（< 50 kb）DNA。通常残留的碳水化合物分子和 β-琼脂糖酶 I 不会影响随后的 DNA 操作，如限制性内切酶消化、连接反应和转化反应。

  • 相关产品

    相关产品

    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  • 注意事项

    1. β-琼脂糖酶 I 可以在 40-45℃ 条件下保持几个小时的活性，反应体系中存在琼脂糖可以使其更加稳定。
    2. 只有低熔点琼脂糖适用于琼脂糖酶 I 消化，因为溶液必须在 42℃ 的孵育温度下保持液态。如果在反应时间内温度降至 42 摄氏度以下，即使是低熔点琼脂糖也会开始凝固，导致无法消化。
    3. 当温度高于 45℃ 时，β-琼脂糖酶 I 迅速失活。因此，在较大反应体积中使用时，务必留出足够的时间让融化的琼脂平衡到 42℃。
    4. β-琼脂糖酶 I 最适合用于以 TAE 缓冲液配制的凝胶。若要用于以 TBE 缓冲液配制的凝胶，建议将 β-琼脂糖酶 I 的用量加倍。
    5. 在琼脂糖含量不超过 1% 的溶液中，β-琼脂糖酶 I 酶切效率最高。为了最大限度地消化高浓度凝胶，将凝胶切片在 65℃ 条件下熔化，并用 1X β-琼脂糖酶 I 缓冲液调整反应体积，以使琼脂糖的终浓度为 1%。
    6. β-琼脂糖酶 I 在 pH 6.5 时的活性最佳。当 pH 为 5.0-8.5 时，可以保持最佳活性 >75% 的酶活。
    7. 在 95℃ 条件下温育 2 分钟，或在 65℃ 条件下温育 15 分钟，可使 50 单位的 β-琼脂糖酶 I 失活。β-琼脂糖酶 I 可以在 40 – 45℃ 下保持几个小时的活性，反应体系中存在琼脂糖可以使其更加稳定。

  • 参考文献

    1. Yaphe, W. (1957). Can. J. Microbiol. 3, 987-993.
    2. Davis, T. and Guan, C. Unpublished observation

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. DNA Purification from Agarose Gels using Beta Agarase I (NEB #M0392)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can ligation and other DNA manipulations be carried out on β-Agarase I treated gel slices containing DNA?
    2. What is the molecular weight of β-Agarase I?
    3. What type of agarose will β-Agarase I digest?
    4. Will β-Agarase I work in other buffers?
    5. Why does a white precipitate form after the reaction using β-Agarase I?
    6. Can a high percentage low melt gel be digested with β-Agarase I?
    7. What is a common cause of β-Agarase I reaction failure?
    8. Does the gel running buffer have an effect on the β-Agarase I reaction?
    9. How can β-Agarase I be heat inactivated?
    10. How stable is β-Agarase I in reaction?
    11. What is the optimal pH for β-Agarase I digestion?