T4 DNA 连接酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

如需了解 NEB DNA 连接酶产品质量控制的详细信息，请访问连接酶质控页面。

T4 DNA 连接酶竞品研究 – 核酸酶污染
T4 DNA 连接酶 |
在含有荧光标记单链、平末端双链、3´ 或 5´ 突出末端的寡核苷酸反应中，对不同供应商的 T4 DNA 连接酶进行测试。通过毛细管电泳和峰值分析确定核酸酶污染的降解百分比。分辨率达到单核苷酸水平。

重点

  • 从重组酶中分离
  • 随附 10X 反应缓冲液

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有 T4 DNA 连接酶基因。

产品类别:
DNA Ligases Products

应用:
BioBrick® Assembly,
Cloning Ligation,
NEBridge® Golden Gate Assembly

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0202V     -20    
        T4 DNA Ligase M0202VVIAL -20 1 x 0.025 ml 400,000 units/ml
        T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
    • M0202S     -20    
        T4 DNA Ligase M0202SVIAL -20 1 x 0.05 ml 400,000 units/ml
        T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
    • M0202T     -20    
        T4 DNA Ligase M0202TVIAL -20 1 x 0.01 ml 2,000,000 units/ml
        T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
    • M0202L     -20    
        T4 DNA Ligase M0202LVIAL -20 1 x 0.25 ml 400,000 units/ml
        T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
    • M0202M     -20    
        T4 DNA Ligase M0202MVIAL -20 1 x 0.05 ml 2,000,000 units/ml
        T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 20 µl 反应体系，1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16℃ 条件下 30 分钟内能使 50% 的经 HindIII 消化的 λ DNA 片段 [DNA 5´ 末端浓度为 0.12 µM (300 μg/ml)] 连接所需的酶量。

    浓度：
    400,000 粘性末端单位/ml 和 2,000,000 粘性末端单位/ml

    反应条件

    1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
    Incubate at 16°C

    1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM ATP
    10 mM DTT
    (pH 7.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

  • 优势和特性

    应用特性

    • 限制性酶切片段的克隆
    • 将连接子（linkers）和接头（adapters）连接到 DNA 片段的平末端

  • 相关产品

    相关产品

    • 快速末端平齐化™ 试剂盒
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit

    单独销售的组分

    • T4 DNA 连接酶反应缓冲液

  • 注意事项

    1. ATP 是反应中必不可少的辅因子。这与需要 NAD 作为辅因子的 E. coli DNA 连接酶不同。
    2. 若需稀释 T4 DNA 连接酶，推荐使用含 50% 甘油的贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001S）稀释，然后于 -20℃ 贮存。如稀释后立即使用，也可以使用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
    3. 连接反应可以在添加 1 mM ATP 的四种限制性内切酶缓冲液的任何一种或在 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）缓冲液中进行。
    4. 室温连接
      为方便起见，连接可在室温（20 – 25℃）条件下进行。连接粘性末端，在 20 µl 反应体系中加入 1 µl T4 DNA 连接酶，反应 10 分钟。连接平末端，在 20 µl 的反应体系中加入 1 µl 的 T4 DNA 连接酶，反应 2 小时；或者加入 1 µl 高浓度的 T4 DNA 连接酶反应 10 分钟。此外，也可选择 NEB Quick Ligation 快速连接试剂盒（#M2200S）[30 次反应] 或（#M2200L）[150 次反应]），在室温条件下反应 5 分钟，即可完成 DNA 平末端和粘性末端的连接。

  • 参考文献

    1. Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982). P.D. Boyer(Ed.), 5, 3. San Diego: Academic Press.
    2. Remaut, E., Tsao, H. and Fiers, W. (1983). Gene. 22, 103-113.
    3. Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2nd Ed.). 1.53-1.73.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Ligation Protocol with T4 DNA Ligase (M0202)
    2. Golden Gate (24 Fragment) Assembly Protocol

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer
    • Tips for Maximizing Ligation Efficiencies

  • 应用实例

    • Breaking through the Limitations of Golden Gate Assembly
    • Efficient Adaptor Ligation for the Preparation of dsDNA Libraries using the Blunt/TA Ligase Master Mix
    • Generating Oligonucleotide Probes using Immobilized T4 DNA Ligase minimizes sample loss and saves time

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Ligase Selection Chart
    • NEB Diluent and Buffer Table
    • Properties of DNA and RNA Ligases
    • Substrate-based Ligase Selection Chart

  • Web 工具

    • NEBcloner®
    • NEBioCalculator®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are some potential problems with the ligation reaction using T4 DNA Ligase that can lead to transformation failure?
    2. What are some other problems that should be considered when trouble shooting a transformation problem?
    3. What problems can be encountered in the restriction digest that can cause ligation using T4 DNA Ligase or subsequent transformation to fail?
    4. What controls should be run to test the cells and DNA when using T4 DNA Ligase?
    5. When should T4 DNA Ligase be the enzyme of choice?
    6. Can the T4 DNA Ligase be used with the Quick Ligase buffer?
    7. What is the definition of a Weiss Unit and a Cohesive End Unit?
    8. What is the difference between the two definitions and why does NEB use the Cohesive End Unit?
    9. How much DNA should be used in a ligation using T4 DNA Ligase?
    10. Can T4 DNA Ligase be used in other NEBuffers, including rCutSmart?
    11. Can T4 DNA Ligase be heat inactivated?

  • 问题解决指南

    • Troubleshooting Tips for Ligation Reactions