Taq DNA 连接酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Taq DNA 连接酶是一款耐热连接酶，能够催化两条相邻 DNA 链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对，并且两条寡核苷酸链之间没有缺口的条件下才可发生。因此，可以用它来检测单核苷酸变异。Taq DNA 连接酶以 NAD 为辅因子。在 37-75℃ 范围内，Taq DNA 连接酶均有活性。

产品来源

从大肠杆菌菌株中纯化获得，携带有克隆自嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）HB8 的连接酶基因（1 – 3）。

产品类别:
DNA Ligases Products

应用:
Gibson Assembly®,
Cloning Ligation

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0208V     -20    
        Taq DNA Ligase M0208VVIAL -20 1 x 0.025 ml 40,000 units/ml
        Taq DNA Ligase Reaction Buffer B0208SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
    • M0208S     -20    
        Taq DNA Ligase M0208SVIAL -20 1 x 0.05 ml 40,000 units/ml
        Taq DNA Ligase Reaction Buffer B0208SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
    • M0208L     -20    
        Taq DNA Ligase M0208LVIAL -20 1 x 0.25 ml 40,000 units/ml
        Taq DNA Ligase Reaction Buffer B0208SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    （粘性末端单位）
    1 单位是指在 45℃ 条件下，当总反应体积为 50 µl 时，15 分钟能连接 50% 的 1 µg BstEII 酶切 λ DNA 的 12 碱基对粘性末端所需的酶量。

    反应条件

    1X Taq DNA 连接酶反应缓冲液
    Incubate at 45°C

    1X Taq DNA 连接酶反应缓冲液
    20 mM Tris-HCl
    25 mM Potassium Acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    1 mM NAD 1
    10 mM DTT
    0.1% Triton® X-100
    (pH 7.3 @ 25°C)

    使用浓度

    40,000 units/ml

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml Recombinant Albumin
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

    单位活性检测条件

    1X Taq DNA 连接酶反应缓冲液和 DNA（20 µg/ml）。在 45℃ 下温育 15 分钟后，通过添加停止酶促反应的染料（50% 甘油，50 mM EDTA 和溴酚蓝）来终止反应，在 70℃ 下加热 10 分钟，然后上样到 0.7% 的琼脂糖凝胶上。由于存在连接酶，BstEII 酶切 λ DNA 的粘性末端将在 70℃ 热处理后保持在一起。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 可用连接酶链式反应和连接酶检测反应对等位基因进行特异性检测（4）。
    • 在引物延伸扩增过程中掺入磷酸化寡核苷酸进行突变（5）。

  • 相关产品

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    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

    单独销售的组分

    • λ DNA-BstEII 消化
    • Taq DNA 连接酶反应缓冲液

  • 注意事项

    1. 反应条件：在 1X Taq DNA 连接酶缓冲液中以 45℃ 温育 DNA 和酶 15 分钟；或在热循环仪中温育 DNA 和酶，温育程序适用于 Barany 在《Genetic Disease Detection and DNA Amplification Using Cloned Thermostable Ligase》（利用克隆的热稳定连接酶进行遗传病检测和 DNA 扩增）（1991 年）中描述的反应。Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 189-193. 用 50% 甘油、50 mM EDTA、溴酚蓝的混合物终止反应。
    2. 1X Taq DNA 连接酶反应缓冲液需要 NAD+ 作为辅因子。在 10X Taq DNA 连接酶反应缓冲液中已添加 NAD+；为延长 NAD+ 辅因子的半衰期，缓冲液应该 -80℃ 条件贮存。
    3. Taq DNA ligase will not ligate short 4-base overlaps (typical of restriction enzyme digests), while it efficiently ligates 12-base pair overhangs.

  • 参考文献

    1. Takahashi, M. et al. (1984). J. Biol. Chem.. 259, 10041-10047.
    2. Barany, F. (1991). Proc. Natl. Acad. Sci. USA.. 88, 189-193.
    3. Barany, F. and Gelfand, D.H. (1991). Gene.. 109, 1-11.
    4. Barany, F. (1991). The Ligase Chain Reaction in a PCR World.. 5-16.
    5. Michael, S.F. (1994). Biotechniques.. 16, 411-412.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Taq DNA Ligase (M0208)

  • 使用指南

    • Tips for Maximizing Ligation Efficiencies

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Ligase Selection Chart
    • Properties of DNA and RNA Ligases

  • Web 工具

    • NEBcloner®
    • NEBioCalculator®
    • Thermostable Ligase Reaction Temperature Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Is Taq DNA Ligase used for a special technique?
    2. How much ligation occurs at mismatches when using Taq DNA Ligase?
    3. How many temperature cycles will Taq DNA Ligase survive?
    4. Can Taq DNA Ligase be used for cloning?
    5. What is the molecular weight of Taq DNA Ligase?
    6. Why is the Taq DNA Ligase buffer brown?
    7. Does Taq DNA Ligase require NAD?
    8. What is the activity of Taq DNA Ligase in other NEBuffers?
    9. What is the activity of Taq DNA Ligase at various temperatures?
    10. What is the stability of Taq DNA Ligase at 95°C?
    11. What is the stability of Taq DNA Ligase at room temperature?
    12. What is LCR and which enzymes do you recommend?
    13. What is LDR and how does it differ from LCR?
    14. How can I design probes for LDR or LCR to maximize specificity?
    15. Do thermostable DNA ligases (such as Taq DNA Ligase, 9°N DNA Ligase, and HiFi Taq DNA Ligase) ligate sticky ends?

  • 问题解决指南

    • Troubleshooting Tips for Ligation Reactions