产品信息

电转连接酶™ 由 T4 DNA 连接酶和经优化的即用型 2X 反应缓冲液组合而成，内含专有连接增强剂，但不含 PEG。该组合专门用于促进各种 DNA 末端（平末端、粘性末端、TA 末端）的高效连接。其可直接用于电穿孔转化的电转感受态细胞，无需脱盐或纯化。由于该缓冲液在 -20℃ 条件下储存时为液体状态，使用时无需解冻*，从而简化了建立反应体系所需的步骤。优化了酶和缓冲液组分的比例，用户只需在室温条件下进行较短时间的温育，即可快速连接所有类型的 DNA 末端。此外，可在低 DNA 浓度的小体系中进行亚克隆连接，为用户节省了宝贵的 DNA 样品。无需纯化或稀释，反应液可直接转化到多种电转感受态大肠杆菌菌株中**。

*冰箱的实际内部温度会有所不同。我们的测试表明，酶和缓冲液在 -20℃ 条件下仍保持液体状态。

**电转连接酶还可用于化学感受态大肠杆菌菌株。与平末端/TA 连接酶预混液（NEB #M0367）相比，其连接效率通常约为 50%。

产品来源

从大肠杆菌菌株中纯化获得，其携带有编码 T4 DNA 连接酶的重组基因。

产品类别:

DNA Ligases Products

应用:

Cloning Ligation

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  M0369S     -20       ElectroLigase® M0369SVIAL -20 1 x 0.05 ml Not Applicable   ElectroLigase® Reaction Buffer B0369SVIAL -20 1 x 0.25 ml 2 X

• 特性和用法

  热失活

  65°C for 15 minutes

• 优势和特性

  应用特性

  • 载体构建
  • 连接子连接
  • 片段组装
  • 文库构建
  • TA 克隆

• 相关产品

  相关产品

  • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
  • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
  • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

• 注意事项

  1. 用法说明：

     细胞： 感受态细胞的效率可能相差几个数量级。观察到的连接效率与用于转化的感受态细胞效率有直接关系。转化未切割载体作为对照，以用于比较。

     DNA： 用于连接的纯化 DNA 可溶于 dH₂O（推荐使用 Milli-Q® 水或同等纯度的水）；也可使用 TE 或其它稀释缓冲液。为实现最佳连接效果，须添加 20 – 100 ng 的载体 DNA 及 3 倍摩尔量的插入片段。若连接体积大于 11 μl，则相应增加电转连接酶反应缓冲液的体积。对于单片段插入，插入片段与载体的最佳比例为 2:1 至 6:1。低于 2:1 就会导致较低的连接效率，高于 6:1 则会导致多片段插入。如果无法确定 DNA 浓度，请以不同的比例进行多个平行的连接。

     时间和温度： 大多数使用电转连接酶在 4 – 37℃ 范围内进行的连接，会在 60 分钟以内到达终点。温育时间过长并不会提高连接效率 在对 4℃、16℃、25℃ 及 37℃ 条件下的性能进行评估后，我们建议在 25℃（室温）条件下温育。多数情况下均可在 30 分钟内达到 50% 的连接效率。

     生物学特性： 某些 DNA 序列不易克隆。大肠杆菌会倾向于丢失形成结构的 DNA 序列，包括反向重复序列和串联重复的序列。大肠杆菌无法耐受某些重组蛋白，因此可能会导致转化率较差或菌落数较小。

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Ligation Protocol for Cloning with ElectroLigase® (M0369)
  2. Transformation Protocol (M0369)

• 使用指南

  • Tips for Maximizing Ligation Efficiencies

工具 & 资源

• 选择指南

  • DNA Ligase Selection Chart
  • Properties of DNA and RNA Ligases

• Web 工具

  • NEBcloner^®
  • NEBioCalculator®

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. My transformations using ElectroLigase® reactions produced no colonies. What happened?
  2. Can ligation reactions set-up with ElectroLigase® be used for transformation of chemically competent cells?
  3. Do I need to dilute the ElectroLigase® reaction in order to use it to transform electrocompetent cells?
  4. Can ElectroLigase® reactions be incubated for longer than 30 minutes?
  5. Can I incubate an ElectroLigase® ligation reaction at a temperature other than 25°C?
  6. I used an ElectroLigase® reaction to transform electrocompetent cells and I experienced arcing of my sample. What happened?

• 问题解决指南

  • Troubleshooting Tips for Ligation Reactions