核酸内切酶 VIII |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

大肠杆菌核酸内切酶 VIII 既有 N-糖基酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-糖基酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶（AP 位点）。AP-裂解酶活性则分别在 AP 位点的 3´ 和 5´ 端切割磷酸二酯键，产生 5´ 磷酸末端和 3´ 磷末端。能被核酸内切酶 VIII 识别并去除的受损碱基包括：尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲基乙内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二氢胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲（1,2）。尽管核酸内切酶 VIII 与核酸内切酶 III 的活性相似，但核酸内切酶 VIII 具有 β 和 δ 裂解酶活性，核酸内切酶 III 只有 β 裂解酶活性。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆的 nei 基因。

产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0299S     -20    
        Endonuclease VIII M0299SVIAL -20 1 x 0.1 ml 10,000 units/ml
        Endonuclease VIII Reaction Buffer B0299SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
    • M0299L     -20    
        Endonuclease VIII M0299LVIAL -20 1 x 0.5 ml 10,000 units/ml
        Endonuclease VIII Reaction Buffer B0299SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 10 µl 总反应体系，含 10 pmol 荧光标记寡核苷酸双链的 1X 核酸内切酶 VIII 反应缓冲液中，37℃ 条件下，1 小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点*的 34 bp 寡核苷酸双链所需的酶量。

    * AP 位点创建方法：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。

    反应条件

    1X 核酸内切酶 VIII 反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X 核酸内切酶 VIII 反应缓冲液
    10 mM Tris-HCl
    75 mM NaCl
    1 mM EDTA
    (pH 8 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    250 mM NaCl
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    pH 8 @ 25°C

    热失活

    75°C for 10 minutes

    单位活性检测条件

    10 μl 总反应体系，含 1X 核酸内切酶 VIII 反应缓冲液和 10 pmol 荧光标记寡核苷酸双链。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 单细胞凝胶电泳（彗星试验）（3,4,5）
    • 碱洗脱（6）
    • 碱解旋（7）

  • 相关产品

    相关产品

    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  • 注意事项

    1. 彗星试验的推荐稀释倍数：1:104 到 1:105（3,4,5,8）。具体操作说明请登陆：http://cometassay.com
    2. 核酸内切酶 VIII 在 rCutSmart 缓冲液（NEB #B6004）中具有完全活性。核酸内切酶 VIII 在 NEBuffer 1（NEB #B7001）中的活性为 75%，在 NEBuffer 4（NEB #B7004）中的活性为 75%，在 NEBuffer 2（NEB #B7002）中的活性为 50%。不建议在 NEBuffer 3（NEB #B7003）中使用核酸内切酶 VIII。

  • 参考文献

    1. Dizdaroglu, M., Laval, J. and Boiteux, S. (1993). Biochemistry . 32, 12105-12111.
    2. Hatahet, Z. et al. (1994). J. Biol. Chem.. 269, 18814-18820.
    3. Singh, N. et al. (1988). Exp. Cell. Res. . 175, 184-191.
    4. Collins, A. et al. (1993). Carcinogenesis . 14, 1733-1735.
    5. Collins, A. et al. (1996). Environ. Health Perspect . 104, 465-469.
    6. Pflaum, M. et al. (1998). Free Rad. Res. . 29, 585-594.
    7. Hartwig, A. et al. (1996). Toxicol. Lett.. 88, 85-90.
    8. Marks, K. unpublished observation.

操作说明、说明书 & 用法

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer
    • DNA Damage and PreCR

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
    • DNA Repair Enzymes on Damaged and Non-standard Bases
    • Properties of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of Endonuclease VIII in NEBUffers?
    2. Does Endonuclease VIII cleave RNA?
    3. Does treatment of DNA with Endonuclease VIII leave a 5′ phosphate?
    4. What damaged bases does Endonuclease VIII recognize?
    5. Will Endonuclease VIII work in rCutSmart buffer?