多重 PCR 5X 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

多重 PCR 可在一次反应中同时检测两种或多种产物。在实验室检测和法医/诊断基因分型检测中，对多重 PCR 技术的需求越来越大（1,2）。多重 PCR 也可通过 cDNA 模板进行半定量基因表达分析。 NEB 多重 PCR 5X 预混液使用便捷，含有高质量的重组 Taq DNA 聚合酶。预混液经过优化，可呈现高产量和稳定性能。使用人类基因组 DNA 进行 15 重 PCR（图 1）和使用 cDNA 产物作为模板进行 8 重 PCR（图 2）测试，展示其性能。5X 剂型可让用户最大限度地加入引物、模板 DNA 和其它组分。

图 1
多重 PCR 5X 预混液 |
使用不同量的人类基因组 DNA 进行 15 重 PCR。1X 多重 PCR 5X 预混液搭配每种 0.15 μM 的引物使用。循环条件：95℃ 1 分钟；95℃ 20 秒、60℃ 1 分钟 和 68℃ 2 分钟，35 个循环。Marker (M) 为 1 kb Plus DNA Ladder（NEB #N3200）。
图 2
多重 PCR 5X 预混液 |
使用 1 ng 人类脾脏总 RNA 的 cDNA 产物进行 8 重 PCR。循环条件：95℃ 1 分钟；95℃ 20 秒、60℃ 30 秒和 68℃ 2 分钟，30 个循环。扩增片段长度标注在胶图旁边。
图 3
多重 PCR 5X 预混液 |
比较单重和多重 PCR 反应的产量。图 A 显示了人类基因组 DNA 片段的扩增（长度标注在胶图左侧）。泳道 1 为 3 重反应，泳道 2 – 4 为单重反应，泳道 5 – 6 为 2 重反应；泳道 7 为 1 kb DNA Ladder（NEB #N3232）。图 B 显示了使用 cDNA 模板对 5 个 mRNA 的表达分析结果（使用 ProtoScript 试剂盒对人类脾脏总 RNA 进行第一链合成）；泳道 1 为以 cDNA 为模板进行 5 重 PCR 反应，而泳道 2 – 6 为单重 PCR 反应；泳道 7 为 100 bp DNA Ladder（NEB #N3231）。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自水生嗜热菌（Thermus aquaticus）YT-1 的 Taq DNA 聚合酶基因。

产品类别:
Master Mixes Products,
Taq DNA Polymerase Products

应用:
Multiplex PCR,
Specialty PCR,
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0284S     -20    
        Multiplex PCR 5X Master Mix M0284SVIAL -20 1 x 1 ml 5 X

  • 特性和用法

    1X 预混液组分

    20 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    30 mM NH4Cl
    2.5 mM MgCl2
    0.3 mM dNTPs
    3.2% Glycerol
    0.08% IGEPAL® CA-630
    0.07% Tween® 20
    67 units/ml Taq DNA Polymerase
    pH 8.9 @ 25°C

    热失活

    否

    分子量

    理论上的: 94000 道尔顿

    5′ – 3′ 核酸外切酶

    Yes

    3′ – 5′ 核酸外切酶

    No

    链置换

    No

    产物末端

    • 3´ 单碱基突出末端

    单位活性检测条件

    1X ThermoPol® 反应缓冲液、200 µM dNTP（含 [3H]-dTTP）和 15 nM 已结合引物的 M13 DNA。

    单位定义：
    1 单位的 Taq DNA 聚合酶是指在 75℃ 条件下，30 分钟能使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶物所需要的酶量。

  • 优势和特性

    Features

    • 多重 Taq 预混液

  • 注意事项

    1. 使用高质量的引物（脱盐或 HPLC 纯化）。
    2. 在 0.5X TE 缓冲液中将引物浓度精确定量至 50 μM。
    3. 分别测试 PCR 引物对，建议使用温度梯度 PCR 仪测试。
    4. 在 0.5X TE 缓冲液中均匀混合所有引物至 1 μM 浓度。
    5. 可在 -20℃ 下长期储存。
    6. 当 -20℃ 储存时，多重 PCR 5X 预混液反复冻融 15 次仍保持稳定。
    7. 多重 PCR 5X 预混液在 4℃ 下可稳定保存三个月。因此，为了便于频繁使用，可分装储存在 4℃ 条件下。

  • 参考文献

    1. Beggs et al. (1990). Hum. Genet.. 86, 45-48.
    2. Krenke et al. (2002). J. Forensic Sci.. 47, 773-785.
    3. Sun, Y. et al. (1993). Biotechniques. 15, 372-374.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Multiplex PCR Guidelines for Multiplex PCR 5X Master Mix
    2. Quick Protocol for Multiplex PCR 5X Master Mix

  • 使用指南

    • Activity of Restriction Enzymes in PCR Buffers
    • Guidelines for PCR Optimization with Thermophilic DNA Polymerases

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What ends will my PCR products have?
    2. How should I determine the appropriate annealing temperature for my reaction?
    3. What should the final primer concentration be in my PCR?
    4. What are the properties of this polymerase (fidelity, product ends, max amplicon, modified base incorporation, etc.)?
    5. What are the stability and storage requirements for NEB’s Taq and OneTaq DNA Polymerases?
    6. Can Taq/OneTaq® DNA Polymerases be used for nick translation?
    7. How can I optimize my PCR when using Taq DNA Polymerase?

  • 问题解决指南

    • PCR Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    在进行多重反应之前，需单独测试每组引物。可能需要调整一些引物的浓度，使混合后的反应体系中所有扩增子均能得到一致稳定的扩增。