LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉（含 UDG） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉（含 UDG）可在室温条件下运输和保存。仅需加入无核酶水即可快速复溶并使用。该产品适用于水解探针法实时检测靶标 RNA。经优化可同时对高达 5 个靶标进行灵敏、线性的多重检测。稳定的冻干剂型可复溶成 2X 或 4X 浓度的预混液，以满足各种上样需求。 

图 1：LyoPrime Luna 为冻干型通用 RT-qPCR 试剂，其性能卓越并可稳定保存 

LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉（含 UDG） |

LyoPrime Luna™ RT-qPCR 预混冻干粉（NEB #L4001）与 Luna RT-qPCR 4X 预混液（NEB #M3019）具备相同的性能，该冻干剂型可在室温条件下运输和保存。

该预混冻干粉包含一步法 RT-qPCR 需要的所有组分，优化的缓冲液中含有 Luna 温启动反转录酶、Taq 热启动 DNA 聚合酶、dNTPs 和小鼠 RNase 抑制剂。Taq 热启动 DNA 聚合酶与新型温启动反转录酶联合使用，可通过基于适配体的可逆抑制来双重控制酶的活性。这种温控活化机制可避免热循环前的非特异扩增，可在复溶后室温建立体系。经基因工程改造的 Luna 温启动反转录酶具有更高的热稳定性，最佳反应温度为 55°C。此外，预混试剂中还添加了独特矫正染料，可与多种 qPCR 仪器兼容，包括需要高 ROX 或低 ROX 参比信号的仪器。

由于 RT-qPCR 灵敏度极高，因此避免 DNA 污染至关重要。该试剂含有热敏 UDG 和 dUTP，可防止模板残留污染（以往的扩增产物可作为后续反应的底物）。与 E.coli UDG 不同的是，热敏 UDG 在温度＞50℃时可完全失活，因此对反应没有影响。

试剂包含非荧光蓝色示踪染料，可避免加样错误。该示踪染料与 qPCR 常用荧光基团的光谱没有重叠，也不会干扰实时检测。 

了解冻干工艺，或咨询定制服务以满足实验需求，请访问 www.neb.com/lyoprime.

图 2：冻干型和液体型 Luna RT-qPCR 预混试剂具备同样优异的性能 

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A. 使用 LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉（含 UDG）(NEB #L4001) 或 Luna® 探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液（含 UDG）(NEB #M3019) 对人 β-actin 靶标进行 RT-qPCR 检测，模板上样量为 8-log 浓度梯度（1 μg–0.1 pg Jurkat 总 RNA），每个浓度重复 4 次，使用 ABI® QuantStudio™ 6 Flex 仪器运行试验。反应体系（20 μl）中，引物浓度为 400 nM，探针浓度为 200 nM，反应设置为产品推荐的循环条件。  B. 冻干试剂（金色）和液体试剂（蓝色）的标准曲线基本相同，即使在最低测试浓度下也展现出良好的线性度和重复性。
图 3：LyoPrime Luna 多重检测性能卓越

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使用 LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉（含 UDG）对 6-log 浓度梯度的 Jurkat 总 RNA（1 μg-10 pg）进行多重 RT-qPCR，实验仪器为 Bio-Rad CFX96 荧光定量仪。结果显示了 5 个人源靶基因的扩增标准曲线和扩增效率。反应体系（20 μl）中，引物和探针浓度均为 200 nM，反应设置为产品推荐的循环条件。在该多重反应中，5 个靶标均检测到良好的线性度、扩增效率和 R2 值。
图 4：LyoPrime Luna 冻干剂型与其液体剂型性能一致，且优于其它品牌

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两位实验人员按照操作说明书，使用市售冻干 RT-qPCR 试剂分别对 8 个不同丰度、长度和 GC 含量的靶标（通过不同颜色显示）进行一步法 RT-qPCR 测试。反应结果就以下方面进行评估：扩增效率、低样品量检测能力及无模板扩增值（ΔCq=无模板对照的平均 Cq-最低起始量的平均 Cq）。此外，还评估了扩增结果的一致性、可重复性和总体曲线质量。结果显示：LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉（含 UDG）（NEB #L4001）与其液体剂型 Luna® 探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液（含 UDG）(NEB #M3019) 性能一致，且优于其它冻干产品。

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图 5：冻干型和液体型 Luna 试剂均可对 SARS-CoV-2 病毒 RNA 进行灵敏检测 

LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉（含 UDG） |

本实验使用 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒（NEB #E3019）中的引物和探针对 2019-nCoV_N1（N1, HEX）、2019-nCoV_N2（N2, FAM）和人源 RNase P（RP, Cy5）进行多重 RT-qPCR 检测，实验仪器为 Bio-Rad® CFX384 荧光定量仪。反应体系（5 μl）中，引物浓度为 400 nM，探针浓度为 200 nM，反应设置为产品推荐的循环条件。实验样品：将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 5 ng/μl Jurkat 总 RNA 中。LyoPrime Luna RT-qPCR 冻干剂型与其液体剂型均展示出良好的线性定量能力（对于 5 和 10 拷贝的 SARS-CoV-2 RNA，N1 和 N2 基因 40 个重复的检出率为 100%，28 个阴性对照重复均无假阳性）。在 96 孔板中测试的 20 μl 体系结果相同。 

图 6：LyoPrime Luna 试剂可对不同传染病靶标进行检测和定量 

LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉（含 UDG） |

分别使用病毒 RNA 基因（FAM）和人源 RNase P（Cy5）靶标的引物和探针进行 RT-qPCR 实验，实验仪器为 Bio-Rad CFX96 荧光定量仪。试验样品：将 100,000-10 拷贝的 ATCC® 合成病毒 RNA（基孔肯雅病毒：VR-3246SD；2 型登革热病毒：VR-3229SD；寨卡病毒：VR-3252SD）掺入到 5 ng/μl 人源（Jurkat）总 RNA 中。每个靶标使用其对应的 ATCC 参考引物和探针序列。反应体系（20 μl）中，引物浓度为 400 nM，探针浓度为 200 nM，反应设置为产品推荐的循环条件。结果显示：LyoPrime Luna RT-qPCR 预混冻干粉对于所有靶标的线性定量和检测结果均非常理想。 
产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • L4001S     15 to 25    
        LyoPrime Luna® Probe One-Step RT-qPCR Mix with UDG L4001SVIAL 15 to 25 2 x 60 reactions Not Applicable
    • L4001P     15 to 25    
        LyoPrime Luna® Probe One-Step RT-qPCR Mix with UDG L4001PLATE 15 to 25 1 x 96 reactions Not Applicable

  • 优势和特性

    Features

    • The vial can be reconstituted at either 2X or 4X if desired to permit higher sample volumes
    • Same versatile features and strong performance of the Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG (NEB #M3019) in a lyophilized format
    • Includes aptamer technology to control RT and DNA polymerase enzyme activity
     

  • 相关产品

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    • Nuclease-free Water
    • M3019 Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG
    • Luna® Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG (No ROX)
    • Monarch® 总 RNA 小量提取试剂盒

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for LyoPrime Luna One-Step RT-qPCR Mix with UDG (NEB #L4001S)
    2. Protocol for LyoPrime Luna® One-Step RT-qPCR Mix with UDG, 96-well plate (NEB #L4001P)

  • 应用实例

    • Key considerations for optimal lyophilized reagent development
    • Optimized conditions for the CDC Influenza SARS-CoV-2 (Flu SC2) Multiplex Assay using Luna One-Step RT-qPCR Reagents

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How should the LyoPrime Luna mix be stored?
    2. How do I rehydrate the LyoPrime Luna mix? Can it be resuspended at a higher concentration?
    3. Are reaction conditions the same for lyophilized and liquid Luna mixes?
    4. When I dissolve the lyophilized product, the solution at first appears turbid. Is this normal?
    5. Can I set up my Luna® RT-qPCR at room temperature?
    6. Why is the Luna® qPCR Mix blue? Will this dye interfere with detection?
    7. Can I run the Luna® qPCR Mix on my qPCR instrument?
    8. Do I need to add ROX?
    9. What RNA samples can be used in RT-qPCR with the Luna® Mix?
    10. How much RNA template should I use in my RT-qPCR reaction?
    11. Can I run multiplex reactions with the Luna® Probe One-Step RT-qPCR Kits? Do I need to change my reaction conditions?
    12. Can I use a ROX-labeled probe with the Luna® Probe Mixes that contain a universal ROX reference dye?
    13. Other companies recommend a 2-min incubation at 25°C for carryover prevention, is a 30-sec incubation at 25°C sufficient?
    14. Can I use the Luna Probe RT-qPCR mixes for viral detection?
    15. What are the differences between the Luna One-Step RT-qPCR products (NEB #E3006, #E3007, #M3019, #M3029 and #L4001)?
    16. For L4001P – Do I need to use the entire Luna plate in a single experiment? How are the 8-well strip tubes separated?
    17. For L4001P – How do I store unused 8-well strip tubes after opening the foil pouch? How long can I keep unused 8-well strip tubes?
    18. For L4001P – How long can I keep the plate or the 8-well strip tubes out of the foil pouch before setting up the reaction?
    19. For L4001P –  What is the purpose of yellow shell adaptor?
    20. For L4001P – Can I reuse the yellow shell adaptor?
    21. For L4001P – Why is there a cardboard tray in the package?

质控、安全 & 法规

  • 质控分析

    每一新批次的 NEB 产品都要经过质控，以满足指定的质量标准，对特定产品的质量标准和每一批次的检测数据可以通过产品说明表格、COA、产品信息卡或者产品手册进行查阅或下载。关于 NEB 产品质控的详细信息，可从此处查阅。

  • 产品说明与变更通知

    产品说明表包含产品的储存温度、有效期和规格，这些文件的命名规则如下：[货号]_[规格]_[版本]

    • L4001S_v1
    • L4001P_v1

  • CoA 文件包含单个批次产品的储存温度、有效期和质控，这些文件的命名规则如下： [货号]_[规格]_[版本]_[Lot#]

    • L4001S_v1_10133633
    • L4001S_v1_10163573
    • L4001S_v1_10175566
    • L4001S_v1_10219111

  • SDS

    以下 SDS 文件可以帮助您安全地使用该产品

    • LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉（含 UDG）

  • 法律 & 免责声明

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    New England Biolabs（NEB）致力于开展合乎伦理的科学研究 – 我们坚信，作为科研工作者，我们的工作是提出重要问题，解决这些问题，将有助于维护我们的生活质量和我们所生活的世界。然而，研究必须始终以安全且合乎道德的方式进行。了解更多。

    许可证

    Nucleic acid-based aptamers for use with thermophilic DNA polymerases and reverse transcriptases are licensed exclusively by New England Biolabs, Inc. from SomaLogic, Inc. New England Biolabs, Inc. gives the Buyer/User a non-exclusive license to use the LyoPrime Luna™ Probe One-Step RT-qPCR Mix with UDG product for Research Use Only (RUO). Commercial use of this product may require a license from New England Biolabs, Inc. For additional information or to inquire about commercial use, please contact [email protected].