OneTaq® RT-PCR 试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

OneTaq® RT-PCR 试剂盒含有两种强大的混合液：M-MuLV 酶混合液和 OneTaq 热启动 2X 预混液（提供标准缓冲液），可用于两步法的 RT-PCR 实验。这两种混合液可确保最快捷地建立反应，为 RT-PCR 反应提供优秀的重复性和稳定性。

使用两种优化的混合液：M-MuLV 酶混合液和 M-MuLV 反应混合液合成 cDNA 第一链。M-MuLV 酶混合液包含 M-MuLV 反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂，M-MuLV 反应混合液包含 dNTP 和经优化的缓冲液。该试剂盒还包含两种优化的反转录引物与无核酸酶水。锚定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 特异结合 polyA 尾的起始端完成退火。经优化的随机引物混合液能随机并持续性地与整个 RNA 模板配对，包括 mRNA 与无 polyA 尾的 RNA。

扩增步骤使用以预混液形式提供的 OneTaq 热启动 DNA 聚合酶。OneTaq 热启动 DNA 聚合酶可提供比 Taq 更高的保真度和更好的扩增效率。可制备高达 6 kb 的 RT-PCR 产物（图 1）。

图 1：cDNA 第一链合成 OneTaq® RT-PCR 试剂盒 |
42℃ 条件下，使用 1X M-MuLV 酶混合液，以 0.5 μg 人脾脏总 RNA 为模板合成 cDNA 第一链，泳道 1、4 和 7 中加入 dT23VN，泳道 2、5 和 8 中加入随机 6 碱基引物混合液。泳道 3、6 和 9 为 No-RT 阴性对照。使用 OneTaq 热启动 1X 预混液，35 个循环扩增 1.5 kb 的 β 肌动蛋白基因片段、0.6 kb 的 GAPDH 基因片段和 5.5 kb 的 p532 基因片段。Marker（M）为 1 kb Plus DNA Ladder（NEB #N3200）。
图 2：cDNA 第一链合成 OneTaq® RT-PCR 试剂盒 |

产品类别:
RT-PCR Products,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
RT-PCR,
RT-PCR & cDNA Synthesis,
Multiplex PCR,

Specialty PCR,

PCR

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E5310S     -20    
        M-MuLV Enzyme Mix M0342AVIAL -20 1 x 0.06 ml 10 X
        M-MuLV Reaction Mix M0343AVIAL -20 1 x 0.4 ml 2 X
        OneTaq® Hot Start 2X Master Mix with Standard Buffer M0484SVIAL -20 1 x 1.25 ml 2 X
        Random Primer Mix S1330AVIAL -20 1 x 0.07 ml 60 µM
        Oligo d(T)23 VN S1332AVIAL -20 1 x 0.07 ml 50 µM
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable

  • 相关产品

    相关产品

    • dNTP 套装
    • M-MuLV Reverse Transcriptase
    • OneTaq® 热启动 2X 预混液（提供 GC 缓冲液）
    • 小鼠 RNase 抑制剂

  • 参考文献

    1. Liao, J. and Gong, Z. (1997). Biotechniques. 23, 368-370.
    2. Van Gilst, M.R. et al. (2005). PLoS Biology. 3, 301-312.
    3. Sambrook, J. and Russel, D.W. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 3rd Ed..
    4. Don, R.H. et al. (1991). Nucleic Acid Research. 19, 4008.
    5. Aguila et al. (2005). BMC Molecular Biology. 6, 9.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. PCR Amplification with OneTaq® RT-PCR Kit
    2. First strand cDNA synthesis OneTaq® RT-PCR Kit

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE5310

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Why do I have a low yield of PCR product?
    2. Why am I getting a low yield of cDNA?
    3. Why do I see products of the wrong size?