BstEII |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

本酶提供高保真版 BstEII-HF®（NEB #R3162）

高保真（HF）限制性内切酶在 rCutSmart 缓冲液中具有 100% 活性；统一缓冲液意味着更加直接、简化的样品处理过程。HF 内切酶还会显著降低星号活性。所有 HF 内切酶均符合省时酶（Time-Saver）标准，可在 5-15 分钟内酶切底物 DNA，也可实现过夜酶切，而且不会造成 DNA 降解。HF 限制性内切酶在改造时将性能作为重要指标，可在更宽的条件下具有完全活性，最大限度地减少非特异性酶切产物，并且为实验设计提供灵活性。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus ET）（N. Welker）的 BstEII 基因。

产品类别:
Discontinued (<3 years)

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • R0162V     -20    
        BstEII R0162VVIAL -20 1 x 0.1 ml 10,000 units/ml
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，60℃ 条件下，1 小时内酶切 1 µg λ  DNA 所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ r3.1
    Incubate at 60°C

    1X NEBuffer™ r3.1
    100 mM NaCl
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    在不同缓冲液中的活性

    NEBuffer™ r1.1: 10%
    NEBuffer™ r2.1: 75%
    NEBuffer™ r3.1: 100%
    rCutSmart™ Buffer: 75%

    稀释兼容性

    • 稀释液 A

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

    甲基化敏感性

    dam 甲基化: 不敏感
    dcm 甲基化: 不敏感
    CpG甲基化: 不敏感

    在不同温度下的活性

    @37°C: 10%

  • 相关产品

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    • BstEII-HF®
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  • 注意事项

    1. 在已知的 3,000 多种限制性内切酶中，只有少数几种酶能够产生超过 4 个碱基的突出末端，BstEII 就是其中一种。
    2. 在 NEBuffer r2.1 和 rCutSmart 缓冲液中可能出现星号活性。
    3. 因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率，除非增加酶量。如需了解更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
    4. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。
    5. 甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Optimizing Restriction Endonuclease Reactions
    2. Restriction Digest Protocol
    3. Double Digest Protocol with Standard Restriction Enzymes

  • 使用指南

    • Activity at 37°C for Restriction Enzymes with Alternate Incubation Temperatures
    • Cleavage Close to the End of DNA Fragments
    • Dam and Dcm Methylases of E. coli
    • Digestion of Agarose-Embedded DNA: Info for Specific Enzymes
    • Double Digests
    • Effects of CpG Methylation on Restriction Enzyme Cleavage
    • Heat Inactivation
    • NEBuffer Activity/Performance Chart with Restriction Enzymes
    • Optimizing Restriction Endonuclease Reactions
    • Restriction Endonucleases – Survival in a Reaction
    • Restriction Enzyme Diluent Buffer Compatibility
    • Restriction Enzyme Tips
    • Single Letter Codes
    • Star Activity
    • Traditional Cloning Quick Guide

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Alphabetized List of Recognition Sequences
    • Compatible Cohesive Ends and Generation of New Restriction Sites
    • Dam-Dcm and CpG Methylation
    • Enzymes with Multiple Recognition Sequences
    • Frequencies of Restriction Sites
    • Interrupted Palindromes
    • Isoelectric Points (pI) for Restriction Enzymes
    • Isoschizomers
    • Time-Saver™ Qualified Enzymes
    • Why Choose Recombinant Enzymes?

  • Web 工具

    • Competitor Cross-Reference Tool
    • DNA Sequences and Maps Tool
    • Double Digest Finder
    • Enzyme Finder
    • NEBcutter™ v3.0
    • NEBioCalculator®
    • REBASE®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Do I have to set-up digests with Time-Saver™ qualified enzymes for 5-15 minutes? Can I digest longer?
    2. Is this enzyme sensitive to dam, dcm or mammalian CpG methylation?
    3. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?

  • 问题解决指南

    • Restriction Enzyme Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    BstEII 在低盐缓冲液中可能出现星号活性。

    60℃ 温育 1-2 小时后，不会产生额外的切割。