CLIP-Cell™ 阻断剂 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

CLIP-tag 蛋白标记系统能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。CLIP-tag 是一种基于人 O6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase，hAGT）的蛋白。CLIP-tag 的底物是苄基胞嘧啶（benzylcytosine，BC）的衍生物。在标记反应中，底物的苄基部分被替换，与 CLIP-tag 的活性半胱氨酸共价结合，形成稳定的硫醚键。尽管 CLIP-tag 与 SNAP-tag® 基于相同的蛋白，苄基胞嘧啶底物是一类独立的底物，和 SNAP-tag 所识别的苄基鸟嘌呤底物不同。CLIP-tag 和 SNAP-tag 可同时用于同一细胞中两种蛋白的正交和互补标记。

该体系包括两个步骤：亚克隆并表达与 CLIP-tag 融合的目的蛋白；选择 CLIP-tag 底物进行标记融合蛋白。有关利用 CLIP-Cell 底物在标记融合蛋白时使用 BTC 的信息，请参阅本文说明。

图 1：CLIP-Cell 阻断剂结构（MW 286.1） CLIP-Cell™ 阻断剂 |
产品类别:
Discontinued (<3 years)

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 表达 CLIP-tag 融合蛋白的细胞
    • 组织培养材料和培养基
    • 转染试剂
    • 荧光显微镜及适用的滤光装置
    • DMSO

  • 注意事项

    1. 贮存条件：CLIP-Cell 阻断剂应贮存于 -20℃（长期贮存）或 4℃（短期贮存）。如果 CLIP-Cell 阻断剂妥善贮存于 -20℃，干燥贮存的阻断剂至少可以保持稳定三年，溶解在 DMSO 中时至少可保持稳定三个月。
    2. 如需问题解决指南，请参阅 CLIP-Cell 产品随附的说明书。
    3. 请注意，细胞中的蛋白会不断更替和再合成。在阻断细胞内所有现有的 CLIP-tag 融合蛋白后，新的 CLIP-tag 融合蛋白分子可能会在此期间合成，并在与荧光 CLIP-tag 底物一起温育时被标记。这会给人一种阻断剂无效的错觉。为了最大限度地减少对蛋白合成和蛋白运输的影响，可使用放线菌酮处理细胞，并且在 4℃ 温育细胞与荧光 CLIP-tag 底物。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Use with CLIP-tag substrates (S9220)
    2. Labeling of Proteins in vitro (S9220)

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the SNAP-tag®?
    2. How does it work?
    3. How specific is the binding of substrate to the SNAP-tag®?
    4. How does SNAP-tag labeling differ from using GFP fusion proteins?
    5. What linker type and length would you recommend?
    6. Can I clone my protein as a fusion to the N- or C-terminus of the tags?
    7. What is the smallest peptide and biggest protein you have cloned as SNAP-tag fusions?
    8. What is the solubility of SNAP-tag in insect and bacterial expression systems?
    9. What competent cell strains does NEB suggest for expression in E. coli?
    10. What competent cell E. coli strains are suitable for propagating SNAP-tag plasmids?
    11. Can SNAP-tag fusions be purified and refolded from inclusion bodies?
    12. Are substrates toxic to cells?
    13. Can cells expressing SNAP-tag be fixed prior to labeling?
    14. Can SNAP-tag be multiplexed with other protein labeling systems (GFP, Antibody)?
    15. Can you use SNAP-tag for in vivo FRET?
    16. Can cell-impermeable substrates be microinjected into cells, and how is the excess substrate exported?
    17. Does the SNAP-tag labeling reaction work in yeast?
    18. What happens to the fluorophore upon proteolysis?
    19. What conditions are recommended for SNAP-tag labeling in vitro?
    20. What conditions are incompatible with SNAP-tag labeling in vitro?
    21. Can SNAP-tag fusion proteins be labeled in a cell lysate?
    22. I have a compound that I would like to couple to a BG derivative. Where can I get advice?
    23. What is the difference between SNAP-tag and ACP-tag?
    24. Cellular Imaging and Analysis FAQs

  • 问题解决指南

    • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    添加 DMSO 后，使用移液枪吸打混匀至少 10-20 次，然后剧烈涡旋至少 1 分钟，以确保底物完全溶解。

    在完全培养基中稀释底物后，使用移液枪吸打混匀至少 10 次，有助于降低背景。

    增加底物浓度和/或反应时间通常会导致背景较高，并且不一定会增加信噪比（SNR）。