上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
产品信息
高保真(HF)限制性内切酶在 rCutSmart 缓冲液中具有 100% 活性;统一缓冲液意味着更加直接、简化的样品处理过程。HF 内切酶还会显著降低星号活性。所有 HF 内切酶均符合省时酶(Time-Saver)标准,可在 5-15 分钟内酶切底物 DNA,也可实现过夜酶切,而且不会造成 DNA 降解。HF 限制性内切酶在改造时将性能作为重要指标,可在更宽的条件下具有完全活性,最大限度地减少非特异性酶切产物,并且为实验设计提供灵活性。
产品来源
大肠杆菌菌株,携带有克隆自肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)OK8(ATCC 49790)的 KpnI 基因。
- 产品类别:
- Discontinued (<3 years)
-
特性和用法
单位定义
一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中,37℃ 条件下,1 小时内酶切 1 µg pXba DNA 所需的酶量。
反应条件
1X NEBuffer™ r1.1
Incubate at 37°C1X NEBuffer™ r1.1
10 mM Bis-Tris-Propane-HCl
10 mM MgCl2
100 µg/ml 重组白蛋白
(pH 7 @ 25°C)在不同缓冲液中的活性
NEBuffer™ r1.1: 100%
NEBuffer™ r2.1: 75%
NEBuffer™ r3.1: <10%
rCutSmart™ Buffer: 50%稀释兼容性
- 稀释液 A
贮存溶液
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C热失活
否
甲基化敏感性
dam 甲基化: 不敏感
dcm 甲基化: 不敏感
CpG甲基化: 不敏感同裂酶
Acc65I
Asp718I
KpnI-HF -
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- Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒(5 μg)
- Nuclease-free Water
-
注意事项
- Acc65I 是 KpnI 的不完全同裂酶。
- KpnI 产生一个 4 碱基的 3´ 突出末端,而 Acc65I 产生一个 4 碱基的 5´ 突出末端。
- 在 rCutSmart 缓冲液中可能出现星号活性。
- 对于不能热失活的酶,我们建议进行柱纯化(如 Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒),或琼脂糖凝胶电泳后切胶回收(建议使用 Monarch 胶回收试剂盒),或酚/氯仿抽提。
- 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。
- 延时酶切、高酶浓度或甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性
操作说明、说明书 & 用法
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操作说明
- Optimizing Restriction Endonuclease Reactions
- Restriction Digest Protocol
- Double Digest Protocol with Standard Restriction Enzymes
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使用指南
- Activity at 37°C for Restriction Enzymes with Alternate Incubation Temperatures
- Activity of Restriction Enzymes in PCR Buffers
- Cleavage Close to the End of DNA Fragments
- Dam and Dcm Methylases of E. coli
- Digestion of Agarose-Embedded DNA: Info for Specific Enzymes
- Double Digests
- Effects of CpG Methylation on Restriction Enzyme Cleavage
- Heat Inactivation
- NEBuffer Activity/Performance Chart with Restriction Enzymes
- Optimizing Restriction Endonuclease Reactions
- Restriction Endonucleases – Survival in a Reaction
- Restriction Enzyme Diluent Buffer Compatibility
- Restriction Enzyme Tips
- Single Letter Codes
- Star Activity
- Traditional Cloning Quick Guide
工具 & 资源
-
选择指南
- Alphabetized List of Recognition Sequences
- Cleavage of Supercoiled DNA
- Compatible Cohesive Ends and Generation of New Restriction Sites
- Dam-Dcm and CpG Methylation
- Frequencies of Restriction Sites
- Isoelectric Points (pI) for Restriction Enzymes
- Isoschizomers
- NEB Diluent and Buffer Table
- Time-Saver™ Qualified Enzymes
- Why Choose Recombinant Enzymes?
-
Web 工具
- Competitor Cross-Reference Tool
- DNA Sequences and Maps Tool
- Double Digest Finder
- Enzyme Finder
- NEBcutter™ v3.0
- NEBioCalculator®
- REBASE®
FAQs & 问题解决指南
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FAQs
- How can this enzyme be inactivated?
- Which NEB restriction enzymes are supplied with Gel Loading Dye, Purple (6X)?
- Is this enzyme sensitive to dam, dcm or mammalian CpG methylation?
- Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?
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问题解决指南
- Restriction Enzyme Troubleshooting Guide