尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（也称：尿嘧啶-DNA 糖基化酶） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

E. coli 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）催化从含尿嘧啶的 DNA 上释放尿嘧啶。UDG 能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶，但不能从 6 碱基或更少的寡核苷酸上水解尿嘧啶。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自大肠杆菌的 UDG 基因。

产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0280S     -20    
        Uracil-DNA Glycosylase (UDG) M0280SVIAL -20 1 x 0.2 ml 5,000 units/ml
        UDG Reaction Buffer B0280SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
    • M0280L     -20    
        Uracil-DNA Glycosylase (UDG) M0280LVIAL -20 1 x 1 ml 5,000 units/ml
        UDG Reaction Buffer B0280SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指每分钟从含尿嘧啶双链 DNA 上催化释放 60 pmol 尿嘧啶所需要的酶量。通过检测 37℃ 条件下，30 分钟从 50 µl 含 0.2 µg DNA（104-105 cpm/µg）的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。

    反应条件

    1X UDG 反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X UDG 反应缓冲液
    20 mM Tris-HCl
    1 mM DTT
    1 mM EDTA
    (pH 8 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    0.1 mg/ml Recombinant Albumin
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

    单位活性检测条件

    50 µl 总反应体系，含 1X UDG 反应缓冲液、1 单位尿嘧啶 DNA 糖基酶、0.2 µg 3H-尿嘧啶 DNA（104 -°105cpm/μg），37℃ 温育 30 分钟。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 在 37℃ 条件下，1 单位 UDG 与 0.1 µg 含尿嘧啶的 DNA 温育 10 分钟后，此 DNA 不能再被 DNA 聚合酶复制。95℃ 加热 10 分钟可使该酶 95% 的活性丧失。由于 95℃ 热处理后该酶仍有部分活性，建议加入尿嘧啶糖基酶抑制剂来阻止产物 DNA 的降解，也可以立即用酚/氯仿抽提反应产物。

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    • 尿嘧啶糖基酶抑制剂（UGI）（也称：尿嘧啶糖基化酶抑制剂）

    单独销售的组分

    • UDG Reaction Buffer

  • 注意事项

    1. UDG 在较广的 pH 值范围内均有活性，最适 pH 为 8.0，不需要二价阳离子。活性受高离子强度（> 200 mM）所抑制。

  • 参考文献

    1. Lindahl, T. et al. (1977). J. Biol. Chem.. 252, 3286-3294.
    2. Wang, Z. et al. (1991). Gene. 99, 31-37.
    3. Devchand, P.R. et al. (1993). Nucl. Acids Res.. 21, 3437-3443.

操作说明、说明书 & 用法

  • 使用指南

    • DNA Damage and PreCR

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
    • DNA Repair Enzymes on Damaged and Non-standard Bases
    • Properties of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of UDG in the NEBuffers 1-4?
    2. Will UDG work in T4 DNA ligase buffer?
    3. What is the molecular weight of UDG?
    4. Is UDG a tagged protein?
    5. I see that UDG works optimally at 37°C. Do you have another glycosylase that works at higher temperatures?
    6. Does the Uracil Glycosylase inhibitor (UGI) inhibit UDG?
    7. Does UDG cut RNA?
    8. Can UDG be used to remove dU from a short 21mer oligo? Do the dU residues need to be spaced in any special way to avoid problems with cleavage?
    9. Are there any specific recommendations for the use of UDG on single stranded DNA? The materials on the web and data card seem to describe conditions for use with dsDNA.
    10. What is the difference between UDG and UNG?
    11. Does UDG release uracil from ss and dsDNA?