iPS Cell Monitoring Kit

发表于2023年8月23日由Wako和光纯药中国

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人ES/iPS细胞检测试剂盒

可检测未分化细胞数

　　rBC2LCN（AiLecS1）来源于Burkholderia cenocepacia，凝集素 BC2L-C 的N末端域在大肠菌表达的重组蛋白。

　　rBC2LCN 对人类ES/ iPS细胞表面足糖萼蛋白的粘蛋白O-型糖链-H-3型（Fucα1-2Galβ1-3GalNAc）具有高亲和性，因此 rBC2LCN 被认为是可以检测人类ES/ iPS细胞的未分化标志物。

　　通过 rBC2LCN 把糖蛋白（H-3 型聚合足糖萼）从人类ES/iPS细胞表面释放到培养液中。该试剂盒通过rBC2LCN和未分化标记抗体的 Sandwich Assay 测定法，定量测定从人类ES/iPS细胞表面释放到培养中的糖蛋白数量，进而可推算出人类ES/iPS细胞数。

人ES/iPS 细胞检测试剂盒 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit

◆特点

　●　通过对培养上清的分析，监测未分化细胞数的增减。

　●　因其测定对象为培养上清，不会在检查过程中消耗细胞数量，且可在此过程中继续进行细胞培养

　●　少量的培养上清（50 μL）即可分析

　●　采用ELISA测定法，可简单快速的处理多样品

　试剂盒构成

构成品品名	容量×数量
rBC2LCN固相检测板	96 well×1板
HRP标识抗体溶液	400 μL×1支
阴性对照品	1 mL×1支
阳性对照品	100 μL×1支
稀释溶液	15 mL×1支
清洗液（10×）	100 mL×1支
TMB溶液	10 mL×1支
显色停止液	10 mL×1支
封板贴	4片

◆原理

　●标准曲线制作

　　该试剂盒中未含有绘制标准曲线用的标准品。因此，请按照下述顺序调制标准品后，再行绘制标准曲线：

　　　1.　在未分化维持培养条件下进行人ES/ iPS细胞培养，更换培养基的第二天（18至24小时后）回收培养上清。

　　　2.　细胞剥离，测定人S/ iPS细胞数。

　　　3.　计算出回收到的培养上清中所含的人ES/ iPS细胞数。如：培养基量 5 mL，测定细胞数为 5×10⁶cells 时，则回收培养上清中的

　　　　　人ES/ iPS细胞数即为 1×10⁶cells/mL。

　　　4.　利用回收的培养上清未分化维持用培养基或已分化培养基，制成已知细胞浓度的稀释系列，以绘制标准曲线。

◆分化诱导时的使用案例

　　　1.　在未分化维持培养时，对人ES/iPS细胞的培养上清进行取样，计算人ES/iPS细胞数。

　　　2.　在分化用培养基中对第１项的培养上清进行稀释，制成稀释系列，以绘制该试剂盒的标准曲线。

　　　3.　使用本试剂盒测定可确认人ES/iPS细胞数的培养上清。

　　　4.　推算分化条件下残存的人ES/iPS细胞数

【细胞株间和培养基间的比较】

　　在各个未分化维持用培养基（培养基A、B、C、D）中分别培养人类iPS细胞201B7株和253G4，更换培养基后第二天回收培养上清。计算细胞数量，用各个未分化维持用培养基将各培养上清稀释至2,000cells/mL，进而测定该试剂盒的吸光度。测定结果如下图所示。结果表明，即使细胞株或培养基等培养条件的细胞数量恒定，信号强度也有差异。因此，必须为培养条件绘制标准曲线。

人ES/iPS 细胞检测试剂盒 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit

【人类iPS细胞培养上清的测定】

　　用 StemSure^® hPSC 培养基培养人类iPS细胞201B7株，更换培养基第二天回收该培养基的培养上清。于此同时，计算细胞数量，阶段性的在 StemSure^® hPSC 培养基中稀释培养上清，并将稀释后的培养上清用试剂盒检测。结果可得到一个极高相关系数的线性公式。根据这个线性公式求出该培养条件下的人类iPS细胞检测下限值^※为108 cells/mL。

※检测下限值：根据培养基背景吸光度平均值+3.3SD和线性公式计算出来的细胞数量。

人ES/iPS 细胞检测试剂盒 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit

【分化细胞培养上清和人类iPS细胞培养上清液混合检测】

　　将含有成纤维细胞和人膝关节软骨（NHAC-kn）细胞的血清培养基上清与人类iPS细胞培养上清混合后，确认能否测定添加在其中的未分化细胞标志物。将iPS细胞混合比例0~20%（0～2×10⁴ cells/mL：总细胞数 1×10⁵ cells/mL）的人iPS细胞培养上清，混合到成纤维细胞和人膝关节软骨细胞培养上清中，用试剂盒检测。在血清和成纤维细胞存在的条件下，可在培养上清中测定出人iPS细胞培养上清。

　　另外还可从成纤维细胞/人膝关节软骨细胞和iPS细胞的混合试验材料中得出一个线性公式，根据该公式可求出人iPS细胞的检测下限值^※，分别为：170 cells/mL 和 96 cells/mL。

人ES/iPS 细胞检测试剂盒 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit

　使用注意项

　　●　由于细胞株、培养基种类等培养条件的不同，会导致信号轻度和细胞数的关系产生差异，所以必须绘制细胞株、未分化维持培养条

　　　件、分化诱导培养基标准曲线。

　　●　不同培养条件下，不能依靠信号强弱来评定未分化性。未分化性的评定一定要在相同培养条件下进行。

　　●　用该试剂盒测算出来的ES/iPS细胞数与实际细胞数未必一致。对未分化维持状态和进行细胞分化的监控，也是需要参考的指标之一。

欲了解更多相关资料请点击文字：无损监测具有致瘤性人ES/iPS细胞的技术

人ES/iPS 细胞检测试剂盒 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit

人ES/iPS 细胞检测试剂盒 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit 说明书.pdf

人ES/iPS 细胞检测试剂盒 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit

人ES/iPS 细胞检测试剂盒 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit 人类ES/iPS细胞测定试剂盒单页_1606WAAU01.pdf

◆相关产品

●荧光标识rBC2LCN
　　添加到人类ES/iPS细胞培养液中，可为人类ES/iPS活细胞染色。

产品编号	品名	规格	容量	保存温度·法规
180-02991	rBC2LCN-FITC【AiLecS1-FITC】 Ex.495 nm,Em.520 nm	细胞染色用	100 μL
186-02993			100 μL×5
186-03211	rBC2LCN-547【AiLecS1-547】 Ex.551nm,Em.565nm	细胞染色用	100 μL
182-03213			100 μL×5
185-03161	rBC2LCN-635【AiLecS1-635】 Ex.634 nm,Em.654 nm	细胞染色用	100 μL
181-03163			100 μL×5

●rBC2LCN-PE23
　　仅加入含有人类ES/ iPS细胞的培养液中，可以选择性地杀死人类ES/ iPS细胞。

产品编号

品名

规格

容量

保存温度·法规

180-03231

rBC2LCN-PE23

细胞培养用

100 μL

186-03233

100 μL×5

●rBC2LCN汽提溶液
　　可将与人类ES/ iPS细胞表面糖链聚合起来的rBC2LCN从细胞上剥落下来。rBC2LCN剥落后，细胞还可添加其他抗体进行染色、培养。

产品编号	品名	规格	容量	保存温度·法规
182-03171	rBC2LCN Stripping Solution【AiWashS1】	细胞培养用	10 mL

●BC2LCN凝聚素, 重组体、溶液
　　集中未标识的rBC2LCN

生产编号	品名	规格	容　量	保存温度·法规
029-18061	BC2LCN【AiLecS1】Lectin,recombinant, Solution	糖链研究用	1 mg
025-18063	BC2LCN【AiLecS1】Lectin,recombinant, Solution	糖链研究用	1 mg×5

●StemSure^® hPSC培养基Δ
　　无饲养层细胞条件下可用于维持培养人类ES/iPS细胞的无血清液态培养基。原料不含动物体成分。

产品编号	品名	规格	容量	保存温度·法规
197-17571	StemSure^®hPSC Medium Δ	细胞培养用	100 mL
193-17573	StemSure^®hPSC Medium Δ	细胞培养用	100 mL×4
064-05381	Fibloblast Growth Factor (basic),Human, recombinant, Animal-derived-free 【bFGF/FGF2】	细胞生物学用	50 μg
068-05384			100 μg
060-05383			1 mg
160-27051	hPSC Dissociation Solution 人类iPS細胞用单体细胞分散剂。不含酶、动物体来源材料。	细胞培养用	100 mL

●StemSure^®系列
　　通过小鼠ES细胞D3株或人类iPS细胞201B7株，进行品质测验。

产品编号	品名	规格	容量	保存温度·法规
197-16275	StemSure^® D-MEM with Phenol Red and Sodium Pyruvate	细胞培养用	500 mL
197-16775	StemSure^® Serum Replacement	细胞培养用	500 mL
198-15781	StemSure^® 10mmol/l 2-Mercaptoethanol Solution（×100）	细胞培养用	100 mL
195-15791	StemSure^® 50mmol/l Monothioglycerol Solution（×100）可与2ME同等使用的还原剂。医药用外不适用。	细胞培养用	100 mL
190-15805	StemSure^® 0.1w/v% Gelatin Solution	细胞培养用	500 mL
195-16031	StemSure^® Freezing Medium 含有BSA的ES细胞・iPS细胞用冻存液	细胞培养用	100 mL
197-17831	StemSure^® hPSC Freezing Medium, AF 无动物体成分的人类ES·iPS细胞用冻存液	细胞培养用	100 mL
199-16051	StemSure^® LIF,Mouse,recombinant,Solution	细胞培养用	106 units
195-16053	StemSure^® LIF,Mouse,recombinant,Solution	细胞培养用	106 units×10

●Y-27632, MF
　　该品作为培养基添加物被登记在原药等登录原簿（MF）中。以自主规格为基础，实现原料管理、制造工程和分析实验的有效检验，创建可以恒常稳定产品品质的体制。＜点击此处＞

●ES・iPS细胞研究用试剂
　　2007年iPS细胞确立发表后，许多与iPS细胞相关的文献纷纷发表。在各种各样的文献中报道出来的与ES细胞・iPS细胞的未分化功能维持和分化诱导相关的低分子化合物也逐渐阵容化。＜点击此处＞

●液态培养基・细胞培养用试剂
　　我们有着以液态培养基为首的平衡盐溶液、细胞剥离·分散液、抗生物质溶液、细胞外基质等丰富的产品种类。＜点击此处＞

Q：　培养上清中会有糖萼蛋白残留吗？

A：　糖萼蛋白会被释放到培养上清中。培养上清在37℃条件下保存８天，信号都不会减弱，因此作为本试剂盒测试对象的糖萼蛋白上的糖链

在此期间都能保持其稳定性。如果冷冻保存的情况下，糖链安定性可稳定维持４个月。（但切记避免反复冻融。）

Q：　糖萼蛋白可作为标准品使用吗？

A：　该试剂盒是用于检测糖萼上的糖链的。因合成附有糖链的蛋白质很困难，所以生产出试剂盒适用的标准品也不易。虽然可能可以制作出不

带糖链的糖萼蛋白，但是否能够作为标准品就不得而知了。

Q：　释放的足糖萼蛋白长度是恒定的吗？

A：　足糖萼蛋白是氨基酸配列恒定的，分子量为 55 kDa 的蛋白质，但实际上足糖萼蛋白上还附有Ｏ型糖链、N型糖链和葡糖胺聚糖，分子量

为240 kDa 以上的大型粘蛋白分子。因是由糖链修饰程度和性质不同的分子群混合起来的异质糖蛋白质群，分子量并不是恒定的。

电泳分子量＞240kDa。

Q：　在三维细胞培养中，足糖萼蛋白也能释放出来吗？

A：　是的，三维培养中也能释放足糖萼蛋白。

Q：　足糖萼蛋白的作用是什么？

A：　足糖萼蛋白在人类iPS细胞中的机能暂时未知，但和未分化细胞的形态、增值性、分化能等有着密切的关系。它是发现肾脏肾小球足细胞的

主要糖蛋白，在足细胞形态的形成和足细胞机能中起重作用。足糖萼蛋白缺失的小鼠，会引起肾脏异常致死。

Q：　回收培养上清时，是否需要进行混匀？

A：　是的。摇晃孔盘/孔板轻轻混匀后，再进行培养上清的回收。

Q：　阳性对照品和阴性对照品的使用目的是什么？

A：　用以确认试剂盒反应系是否正常进行。

Tateno, H., Onuma, Y., Ito, Y., Hiemori, K., Aiki, Y., Shimizu, M., Higuchi, K., Fukuda, M., Warashina, M., Honda, S., Asashima, M. and Hirabayashi, J.: Sci. Rep., 4, 4069 (2014).

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
299-78301	Human ES/iPS Cell Monitoring Kit	96次用	再生医疗研究用

StemSure® hPSC培养基△ 人ES/iPS细胞无饲养层无血清培养基

发表于2023年6月8日由Wako和光纯药中国

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参考文献

人ES/iPS细胞无饲养层无血清培养基

StemSure^® hPSC培养基△

　　本品是在无饲养层条件下，可用于人ES/iPS细胞未分化维持培养的无动物血清培养基。继代培养时添加 Y-27632，可实现单细胞的继代培养。（本品不含Bfgf）

StemSure® hPSC培养基△ 人ES/iPS细胞无饲养层无血清培养基

◆ 特点

●　不含动物来源成分或白蛋白，批次差异小

●　非医药用外毒物、剧毒物，处理简单

●　可使用 Matrgel^®、iMtrix-511、玻璃粘连蛋白等涂层剂

●　可使用 Accutase、TrypLE™ Select、TrypLE™ Express、hPSC 解离溶液等解离液

细胞形态

　　本产品的培养的人iPS细胞，不观察分化的形态，也可稳定地培养。

【细胞株】

人iPS细胞 201B7株

【培养基组成】

StemSure^® hPSC 培养基△+35 ng/ml Bfgf

【涂层剂】

Matrigel^®

【播种细胞数】

1X10⁵cells/well（用6孔板）

　数据提供：

　国立研究开发法人产业技术综合研究所创药基盘研究部门干细胞工学研究组小沼泰子、伊藤弓弦

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
197-17571	StemSure^® hPSC MediumΔ	100ml	细胞培养用
193-17573	StemSure^® hPSC MediumΔ	100mlX4	细胞培养用

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

发表于2023年5月31日由Wako和光纯药中国

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参考文献

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

StemSure^® Serum Replacement

　　本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子，会导致干细胞分化。使用本产品代替血清，可在ES和iPS细胞培养的同时，保持他们的未分化状态，达到稳定培养。
　　本产品不含剧毒物质，将其作为普通物质处理。
　　使用本产品配制培养基培养的小鼠ES细胞，可用于制备嵌合体小鼠，并确认其种系传递。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

◆特点•优势

●　可用于嵌合体小鼠制备，并确认其种系传递。

●　作为血清替代品，用于小鼠ES细胞・人IPS细胞培养。

●　不含剧毒物质。

◆案例•应用

1、嵌合体小鼠的制备与种系传递Update！！

　　将组装 HaloTag^® cDNA 的目标载体导入小鼠ES细胞，用含有 StemSure^® Serum Replacement（SSR）的培养基培养。确认载体导入小鼠ES细胞后，将其注入至 ICR 小鼠的胚盘胞，并移植至 ICR 小鼠的子宫。得到的嵌合体小鼠与 C57BL/6J 小鼠交配，获得F1小鼠。

(1) 　嵌合体小鼠

　　收集嵌合体小鼠的血液，用 TRITC（四甲基若丹明异硫氰酸盐）对 HaloTag^® 蛋白质染色。发现小鼠ES细胞源的 HaloTag^® 的血液被染色，可确认为嵌合化。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

(2)　F1小鼠

　　F1小鼠的血液发现 HaloTag^® 存在，可确认用 SSR 培养基培养的ES细胞嵌合小鼠能够正常存活。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

2、人iPS细胞201B7的培养

(1)　克隆形态与ALP染色

　　已确认可用 StemSure^® Serum Replacement（SSR）培养人iPS细胞 201B7 株。ALP 染色呈阳性。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

　　<培养基组成>
　　D-MEM/Ham's F-12 + 20% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5 ng/mL bFGF

(2)　未分化标记的发现

　　使用 StemSure^®Serum Replacement（SSR）培养的人iPS细胞201B7株，确认各种未分化标记（Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81）呈阳性。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

3、小鼠ES细胞D3的培养

(1)　细胞形态与ALP染色

　　使用 StemSure^®Serum Replacement（SSR）培养小鼠ES细胞D3，能观察到小鼠ES细胞群特有的光泽，ALP染色呈阳性。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

(2)　细胞增殖曲线

　　用不同培养基培养小鼠ES细胞D3进行14继代培养，比较细胞增殖。

　　如下图所示StemSure^® 系列与Ａ公司有同等的性能。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

　　< StemSure^® 系列培养基组成>
　　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

　　（使用胶原包被的12孔板）

(3)　细胞群倍加数*

　　使用不同培养基对小鼠ES细胞D3进行继代培养，检查培养天数与细胞群倍加数的关系。

　　下图显示 StemSure^® 系列与Ａ公司产品的细胞群倍加数相同。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

　　*细胞群倍加数 cell population doubling level，缩写PDL，指从培养开始至现在细胞群的倍增次数。

<培养基组成>

　　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/ml StemSure^® LIF

　　（使用胶原包被的12孔板）

(4)　未分化标记的检测

　　使用 StemSure^® 系列对小鼠ES细胞D3进行５代继代培养，各种未分化标记（Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1）呈阳性。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

　　<培养基组成>
　　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

4、畸形瘤的形成

　　用 StemSure^® 系列对小鼠ES细胞D3进行继代培养。对免疫不全小鼠的皮下注射培养后细胞。在形成皮下畸形瘤，其内部检测出神经组织（外胚叶源）、软骨组织（中胚叶源）、管腔结构纤毛上皮（内胚叶源）。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

　　<培养基组成 >
　　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

★StemSure^® 系列★

　　StemSure^® 系列可培养ES细胞和iPS細胞。使用小鼠ES细胞D3检测每批产品的品质。

　　●　StemSure^®D-MEM・巯基乙醇，硫代甘油

　　●　StemSure^® 明胶溶液

　　●　StemSure^® LIF, 小鼠, 重组. 溶液,

　　●　StemSure^® 冻存溶液

产品编号	产品名称	等级	规格	价格	保存温度・法规情报
197-16275	StemSure^®D-MEM (High Glucose) with Phenol Red and Sodium Pyruvate	细胞培养用	500 mL	询价
198-15781	StemSure^®10mmol/l 2-Mercaptoethanol Solution (×100)	细胞培养用	100 mL	询价
195-15791	StemSure^®50mmol/L Monothioglycerol Solution (×100) 与2ME同等使用的还原剂。不属于毒物。	细胞培养用	100 mL	询价
190-15805	StemSure^®0.1w/v% Gelatin Solution	细胞培养用	500 mL	询价
199-16051 195-16053	StemSure^®LIF, Mouse, recombinant, Solution	细胞培养用	10⁶units 10⁶units×10	询价
195-16031	StemSure^®Freezing Medium	细胞培养用	100 mL	询价

已有案例引用的培养基配方

iPSC培养基组成如下：含15％StemSure Serum Replacement（197-16775; Wako Pure Chemical Industries） DMEM / F12，1％抗生素 – 抗真菌混合溶液，1％非必需氨基酸（139-15651; Wako Pure Chemical Industries ），2mM谷氨酸（16948-004; Nacalai Tesque）和0.1mMβ-巯基乙醇（21438-82; Nacalai Tesque）。文献全文请点击参考文献页面。

1.	Obora, K., Onodera, Y., Takehara, T., Frampton, J., Hasei, J., Ozaki, T., … & Fukuda, K. (2017). Inflammation-induced miRNA-155 inhibits self-renewal of neural stem cells via suppression of CCAAT/enhancer binding protein β (C/EBPβ) expression. Scientific reports, 7, 43604.【mouse neural stem cell (NSC)】
2.	Aihara, A., Koike, T., Abe, N., Nakamura, S., Sawaguchi, A., Nakamura, T., … & Eto, K. (2017). Novel TPO receptor agonist TA-316 contributes to platelet biogenesis from human iPS cells. Blood advances, 1(7), 468-476.
3.	Katayama, M., Kiyono, T., Kuroda, K., Ueda, K., Onuma, M., Shirakawa, H., & Fukuda, T. (2019). Rat-derived feeder cells immortalized by expression of mutant CDK4, cyclin D, and telomerase can support stem cell growth. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Cell Research, 1866(5), 945-956.
4.	Katayama, M., Hirayama, T., Horie, K., Kiyono, T., Donai, K., Takeda, S., … & Fukuda, T. (2016). Induced pluripotent stem cells with six reprogramming factors from prairie vole, which is an animal model for social behaviors. Cell transplantation, 25(5), 783-796.【prairie vole-derived iPSCs(pv-iPSCs)】
5.	Kawata, M., Taniguchi, Y., Mori, D., Yano, F., Ohba, S., Chung, U. I., … & Saito, T. (2017). Different regulation of limb development by p63 transcript variants. PloS one, 12(3), e0174122.【基因编辑小鼠iPS细胞】
6.	Bui, P. L., Nishimura, K., Mondejar, G. S., Kumar, A., Aizawa, S., Murano, K., … & Ito, Y. (2019). Template Activating Factor-I α Regulates Retroviral Silencing during Reprogramming. Cell reports, 29(7), 1909-1922. 【Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) 】
7.	Sumi, S., Kawagoe, M., Abe, R., Yanai, G., Yang, K. C., & Shirouzu, Y. (2017). A multiple-funnels cell culture insert for the scale-up production of uniform cell spheroids. Regenerative therapy, 7, 52-60.
8.	古田明日香, & 中村肇伸. (2019). ES 細胞は代謝シフトを介して全能性細胞へと変化する. In 日本繁殖生物学会講演要旨集第 112 回日本繁殖生物学会大会 (pp. AW1-5). 日本繁殖生物学会.
9.	Onozato, D., Yamashita, M., Nakanishi, A., Akagawa, T., Kida, Y., Ogawa, I., … & Matsunaga, T. (2018). Generation of intestinal organoids suitable for pharmacokinetic studies from human induced pluripotent stem cells. Drug Metabolism and Disposition, 46(11), 1572-1580.
10.	Hayashi, Y., Matsumoto, J., Kumagai, S., Morishita, K., Xiang, L., Kobori, Y., … & Sumaru, K. (2018). Automated adherent cell elimination by a high-speed laser mediated by a light-responsive polymer. Communications biology, 1(1), 218.【hiPSC differentiation】
11.	Osafune, K., Toyoda, T., Takekawa, S., Nakamura, G., & Ito, R. (2019). U.S. Patent Application No. 16/490,394.
12.	Kato, T., Kanemura, Y., Shofuda, T., & Fukusumi, H. (2016). U.S. Patent Application No. 14/900,975.
13.	Eitoku, M., Kato, H., Suganuma, N., & Kiyosawa, H. (2018). Markers associated with neuron-specific Ube3a imprinting during neuronal differentiation of mouse embryonic stem cells. Cytotechnology, 70(1), 45-53.
14.	Onozato, D., Yamashita, M., Fukuyama, R., Akagawa, T., Kida, Y., Koeda, A., … & Matsunaga, T. (2018). Efficient generation of Cynomolgus monkey induced pluripotent stem cell-derived intestinal organoids with pharmacokinetic functions. Stem cells and development, 27(15), 1033-1045.
15.	Katayama, M., Hirayama, T., Kiyono, T., Onuma, M., Tani, T., Takeda, S., … & Fukuda, T. (2017). Immortalized prairie vole-derived fibroblasts (VMF-K4DTs) can be transformed into pluripotent stem cells and provide a useful tool with which to determine optimal reprogramming conditions. Journal of Reproduction and Development, 2016-164.
16.	Matsuyama, A., & Okura, H. (2017). U.S. Patent No. 9,644,181. Washington, DC: U.S. Patent and Trademark Office.
17.	Tomizawa, M. (2016). Culture Medium And Method For Inducing Differentiation of Pluripotent Stem Cells To Hepatoblasts. U.S. Patent Application No. 14/749,715.

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
191-18375	Stemsure^® Serum Replacement Stemsure^®血清替代品	500 mL	细胞培养用

ES/iPS细胞培养试剂

发表于2023年5月26日由Wako和光纯药中国

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ES/iPS细胞培养试剂

保持ES和iPS细胞处于未分化状态并提高重编程效率
Wako Cat. #	产品简介	级别 CAS No.	单位
012-23021	ALK5抑制剂【TGF-β RI激酶抑制剂Ⅱ】 ALK5 Inhibitor [TGF-β RI Kinase Inhibitor II] TGF-β RI 激酶/ALK5抑制剂 [Maherali N., et al.: Curr. Biol., 19, 1718 (2009)]	供细胞生物学使用 CAS 446859-33-2	1 mg
027-09951	(±)Bay K8644【L型钙离子通道激动剂】 (±) Bay K8644 [L type Ca²⁺Channel Agonist] 与Oct3 / 4和Klf4一起使用时，BayK8644能够更有效地培养iPS细胞。 [Shi, Y., et al.: Cell Stem Cell, 3, 568 (2008)]	供生物化学使用 CAS 71145-03-4	5 mg
023-16401	BIX01294【组蛋白甲基转移酶抑制剂】 BIX01294 [Histone Methyltransferase inhibitor] 将神经祖细胞的重编程效率提高到与OCT4、KLF4导入体细胞产生iPS细胞相同的水平。 [Shi, Y., et al.: Cell Stem Cell, 2, 525 (2008)] [Shi, Y., et al.: Cell Stem Cell, 3, 568 (2008)]	供细胞生物学使用 CAS 935693-62-2	2 mg
021-17041	Ⅱ型肌球蛋白抑制剂 (-)-Blebbistatin, 98.0+ % (HPLC) 针对miosin II的特异性抑制剂组蛋白甲基转移酶抑制剂。在将Oct3/4和Klf4递送至神经干细胞期时,提高iPS细胞诱导率。在Oct3/4和Klf4递送到成纤维细胞过程中，该产品与（±）BayK8644共同使用时也会提高iPS细胞诱导率。 [Ohgushi, M., et al.: Cell Stem Cell, 7, 225 (2010)]	供细胞生物学使用 CAS 856925-71-8	1 mg
027-17043		供细胞生物学使用 CAS 856925-71-8	5 mg
029-16241	6-Bromoindirubin-3'-oxime【BIO/GSK-3抑制剂Ⅸ】 6-Bromoindirubin-3'-oxime [BIO/GSK-3 Inhibitor IX] 在无饲养层细胞时可维持人和小鼠ES细胞处于未分化状态。溶于DMSO（确认 1mg/mL） [Sato, N., et al.: Nature Med., 10, 55 (2004)]	供细胞生物学使用 CAS 667463-62-9	1 mg
029-05393	丁酸 Butyric Acid 通过低细胞毒性调控细胞增殖。 [Liang, G., et al.: J. Biol. Chem., 285, 25516 (2010)]	Wako特级纯 CAS 107-92-6	25 mL
023-05396		Wako特级纯 CAS 107-92-6	500 mL
041-30101	DNA甲基转移酶抑制剂【RG108】 DNA Methyltransferase Inhibitor [RG108] 通过低细胞毒性调控细胞增殖。 [Tsumura, A., et al.: Genes Cells, 11, 805 (2006)]		10 mg
047-30103			25 mg
056-08221	EHNA盐酸盐 EHNA Hydrochloride 磷酸二酯酶/腺苷脱氨酶抑制剂。可以用作bFGF的替代品。在无饲养层细胞时有效且可逆地抑制人胚胎干细胞分化并维持多能性。 [Burton, P., et al.: Biochem. J., 575, 432 (2010)]	供细胞生物学使用　 CAS 58337-38-5	10 mg
070-05921	GSK 269962A, 97.0+ % (HPLC)【ROCK抑制剂】 GSK 269962A, 97.0+ % (HPLC) [ROCK Inhibitor] 据报道，ROCK抑制剂能抑制细胞凋亡并提高分离的人胚胎干细胞的存活率和克隆形成率。	供细胞生物学使用 CAS 850664-21-0	2 mg
088-09281	H-1152二氢氯化物【ROCK抑制剂】 H1152 Dihydrochloride [ROCK Inhibitor] 据报道，ROCK抑制剂能抑制细胞凋亡并提高分离的人胚胎干细胞的存活率和克隆形成率。	供细胞生物学使用 CAS 871543-07-6	1 mg
095-05951	IQ-1 与Wnt-3a结合并在无血清条件下维持小鼠ES细胞的增殖和多能性。 [Miyabayashi, T., et al.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 104, 5658 (2007)]	供细胞生物学使用 CAS 331001-62-8	5 mg
110-00831	Kenpaullone GSK-3【CDKs抑制剂】 Kenpaullone GSK-3 [CDKs Inhibitor] 可以在生产iPS细胞时替代Klf4。与Yamanaka因子（Oct3/4，Sox2，Klf4，c-Myc）组合使用时，可以提高重编程效率。可溶于DMSO（1mg/mL确认） [Lyssiotis, CA., et.al.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 106, 8912 (2009)]	供细胞生物学使用 CAS 142273-20-9	1 mg
116-00833		供细胞生物学使用 CAS 142273-20-9	5 mg
162-25291	PD0325901【MAPK 抑制剂】 PD0325901 [MAPK Inhibitor] 与CHIR99021共同使用来维持ES细胞的自体繁殖效率。与SB431542一起使用时，能够显著提高对人iPS细胞的重编程效率。本品亦可提升编程速度。可溶于DMSO（约20mg/mL） [Ying, QL., et al.: Nature, 453, 519 (2008)] [Lin, T.,et al.: Nature Methods., 6, 2237 (2009)]	供细胞生物学使用 CAS 391210-10-9	5 mg
168-25293		供细胞生物学使用 CAS 391210-10-9	25 mg
169-19211	PD-98059【MAPK抑制剂】 PD-98059 [MAPK Inhibitor] 促进胚胎干细胞的自体繁殖。 [Burdon, T., et.al.: Dev. Biol., 210, 30 (1999)] [Hamazaki, T., et.al.: Mol. Cell. Biol., 26, 7539 (2006)]	供生物化学使用 CAS 167869-21-8	5 mg
164-25011	PS48【PDK1抑制剂】 PS48 [PDK1 Inhibitor] 用于分离和维持胚胎干细胞。 [Zhu, S., et al.: Cell Stem Cell, 7, 651 (2010)]	供细胞生物学使用 CAS 1180676-32-7	5 mg
191-15411	小鼠胚胎细胞[Pluripotin]SC-1 (Pluripotin) RasGAP【ERK1抑制剂】 SC-1[Pluripotin] RasGAP [ERK1 Inhibitor] 即使在没有白血病抑制因子（LIF），饲养层细胞和血清的培养基中，也能够维持小鼠ES细胞的未分化状态。溶于DMSO（确认1mg/mL） [Chen, S., et al.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 103, 17266 (2006)]	供细胞生物学使用 CAS 839707-37-8	1 mg
193-01522	丁酸钠【组蛋白脱乙酰酶抑制剂】 Sodium Butyrate [Histone deacetylase Inhibitor] 促进胚胎干细胞的自体繁殖。 [Ware, CB., et.al.: Cell Stem Cell, 4, 359 (2009)]	— CAS 156-54-7	25 g
197-01525		— CAS 156-54-7	500 g
202-18011	Thiazovivin 与SB431542和PD0325901一起使用，可以将产生诱导多能干细胞（iPS）的重编程效率提高200倍以上。 [Lin T., et al.: Nat. Methods, 6, 805 (2009)]	供细胞生物学使用 CAS 1226056-71-8	1 mg
208-18013		供细胞生物学使用 CAS 1226056-71-8	5 mg
227-01071	丙戊酸【组蛋白脱乙酰酶抑制剂】 Valproic Acid [Histone deacetylase Inhibitor] 提高Oct4，Klf4和Sox2的iPS细胞重编程效率。 [Huangfu, D., et al.: Nature Biotechnol., 25, 1269 (2008)]	供生物化学使用 CAS 99-66-1	5 g
225-01072		供生物化学使用 CAS 99-66-1	25 g
253-00591	全新！5 mmol/L Y-27632 溶液 NEW! 5 mmol/L Y-27632 Solution Y-27632, diluted to 5 mmol/L with water. Y-27632, 用水稀释至5 mmol/L	供细胞培养使用	300 μL

ES和iPS细胞的分化诱导/去分化
Wako Cat. #	产品简介	级别 CAS No.	单位
015-22531	5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸转甲酰酶【AMPK抑制剂】 AICAR [5-Amino-4-imidazolecarboxamide-1-beta-D-ribofuranoside] [AMPK Inhibitor] AICAAR抑制脂肪细胞分化并诱导神经干细胞向星形胶质细胞分化。 [Giri, S., et al.: Nutr. Metab (Lond), (2006)] [Zang, Y., et al.: J. Biol. Chem., 283, 6201 (2008)]	供细胞生物学使用 CAS 2627-69-2	100 mg
011-22533		供细胞生物学使用 CAS 2627-69-2	1 g
031-18963	环孢菌素A Ciclosporin A 抑制Notch信号通路并诱导胚胎干细胞从胚体到神经元的分化。 [Fujiwara, M., et al.: PLoS. One,6, e16734 (2011)]	供细胞生物学使用 CAS 59865-13-3	50 mg
035-18961		供细胞生物学使用 CAS 59865-13-3	200 mg
030-20981	环格列酮【PPARγ激动剂】 Ciglitazone [PPARγ agonist] 诱导人间充质干细胞分化为脂肪细胞并抑制其分化为成骨细胞。 [Benvenuti, S., et al.: J. Endocrinol. Invest., 30, RC26 (2007)]	供细胞生物学使用	5 mg
034-21501	CKI-7二氢氯化物 CKI-7 Dihydrochloride 酪蛋白激酶抑制剂（CK1）。与SB431542和Y-27632一起使用诱导人胚胎干细胞和人iPS细胞在无血清和无饲养层细胞的培养基中分化成视网膜祖细胞。 [Takahashi, M., et al.: J. Cell Sci., 122, 3169 (2009)]	供细胞生物学使用 —	5 mg
047-18863	地塞米松 Dexamethasone 调节间充质干细胞的骨分化。 [Jaiswal, N., et al.: J. Cell. Biochem., 64, 295 (1997)	供生物化学使用 CAS 50-02-2	100 mg
041-18861		供生物化学使用 CAS 50-02-2	1 g
097-05911	Indolactam V 蛋白激酶C活化剂 [Melton DA., et al.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106, 15768 (2009)]	供细胞生物学使用 —	1 mg
094-06381	IWR-1-endo Wnt信号抑制剂。稳定β-连环蛋白降解复合物（由Axin2，Apc，Ck1和Gsk3β组成）并刺激β-连环蛋白的降解。	供细胞生物学使用	5 mg
124-06011	LDN193189盐酸盐 LDN193189 Hydrochloride BMP I型受体和ALK2/ALK3的抑制剂。 BMP信号调节胚胎发育，并在成熟组织的生理过程中起至关重要的作用。 [Yu, P. B., et al.: Nat. Med., 14, 1363 (2008)]	供细胞生物学使用	2 mg
129-04861	LY-294002【磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂】 LY-294002 [phosphatidylinositol 3-kinase Inhibitor] 诱导小鼠ES细胞分化为胰岛素生成细胞。	供生物化学使用 CAS 154447-36-6	5 mg
125-04863			10 mg
123-04864			25 mg
166-23991	2,6,9-三取代嘌呤化合物【Hedgeog信号激动剂】 Purmorphamine [Hedgehog Signal Agonist] 诱导间充质干细胞和前成骨细胞分化为成骨细胞。	供细胞生物学使用 CAS 483367-10-8	5 mg
186-01114	全反式维甲酸 all-trans-Retinoic Acid 诱导神经元分化。	供生物化学使用 CAS 302-79-4	50 mg
182-01116			100 mg
182-01111			250 mg
188-01113			1 g
184-02391	Reversine【人A3腺苷受体激动剂】 Reversine [Human A3 adenosine receptor Agonist] 去分化成肌细胞为干细胞。 [Chen, S., et al.: J. Am. Chem. Soc., 126, 410 (2004)]	供细胞生物学使用 CAS 656820-32-5	5 mg
192-16541	SB431542【ALK4, ALK5, ALK7 抑制剂】 SB431542 [ALK4, ALK5, ALK7 Inhibitor] 刺激源自胚胎干细胞的内皮细胞的增殖，分化和细胞片层形成。与Thiazovivin及 PD0325901一起使用，可将重编程效率提高200倍以上，并提高重编程速度。 [Lin, T.,et al.: Nature Methods., 6, 2237 (2009)] [Ogawa, K., et al.: J. Cell. Sci., 120, 55 (2007)]	供细胞生物学使用 CAS 301836-41-9	5 mg
198-16543		供细胞生物学使用 CAS 301836-41-9	25 mg
198-09811	精胺 Spermine 诱导心肌细胞分化	供生物化学使用 CAS 71-44-3	250 mg
194-09813	精胺 Spermine 诱导心肌细胞分化	供生物化学使用 CAS 71-44-3	1 g
203-17561	曲古柳菌素A【组蛋白脱乙酰酶抑制剂】 Trichostatin A [Histone deacetylase Inhibitor] 促进心肌细胞分化。 [Oyama, T., et al.: J. Cell. Biol., 176, 329 (2007)]	供细胞生物学使用 CAS 58880-19-6	1 mg
209-17563		供细胞生物学使用 CAS 58880-19-6	5 mg
207-17601	曲格列酮【PPAR γ 激动剂】 Troglitazone [PPAR γ Agonist] 在人类间充质干细胞中，曲格列酮诱导细胞分化为脂肪细胞并抑制向成骨细胞的分化。 [Benvenuti, S., et al.: J. Endocrinol. Invest., 30, RC26 (2007)]	供药理学使用 CAS 97322-87-7	5 mg
203-17603		供药理学使用 CAS 97322-87-7	50 mg
206-17671	TWS119【GSK-3β抑制剂XⅡ】 TWS119 [GSK-3β Inhibitor XⅡ] 在小鼠ES细胞中，TWS119诱导神经分化。	供细胞生物学使用 CAS 601514-19-6	1 mg
202-17673		供细胞生物学使用 CAS 601514-19-6	5 mg

◆相关产品-StemSure-

Wako Cat. #	产品名称	级别 CAS No.	包装
195-16031	<可用于小鼠ES细胞的无血清细胞冻存液＞ StemSure细胞冻存液 StemSure Freezing Medium	供细胞培养使用	100 mL
190-15805	StemSure 0.1w/v%明胶溶液，来源于猪皮肤 StemSure 0.1 w/v% Gelatin Solution, from Porcine skin	供细胞培养使用	500 mL
199-16051	<用于ES细胞培养＞ StemSure 白细胞抑制因子溶液，小鼠，重组 StemSure LIF, Mouse, recombinant, Solution	供细胞培养使用	1,000,000 units
198-15781	<用于ES细胞培养＞ StemSure 10 mmol/L 2-巯基乙醇溶液 (×100) StemSure 10 mmol/L 2-Mercaptoethanol Solution (×100)	供细胞培养使用60-24-2	100 mL
195-15791	<用于ES细胞培养＞ StemSure 50 mmol/L 硫代甘油溶液 (×100) StemSure 50 mmol/L Monothioglycerol Solution (×100) 相当于2-巯基乙醇 (可选2巯基乙醇)	供细胞培养使用	100 mL

Wako Cat. #

产品名称

级别

CAS No.

包装

129-05601

重组人白血病抑制因子，细胞上清
LIF, Human, recombinant, Culture Supernatant

供细胞培养使用

1 mL

125-05603

1 mL×10

Wako Cat. #

产品名称

级别

CAS No.

包装

141-09041

<神经细胞培养>

N2神经细胞生长添加剂含转铁蛋白（Apo）（×100）

N2 Supplement with Transferrin (Apo) (×100)

神经细胞培养过程中可替代血清

供细胞培养使用

5 mL

141-08941

<神经细胞培养>

N2神经细胞生长添加剂含转铁蛋白（Holo）（×100）

N2 Supplement with Transferrin (Holo) (×100)

神经细胞培养过程中血清的替代品，以转铁蛋白（Apo）制备。

转铁蛋白（Holo）十分常用，但含有转铁蛋白（Apo）的N2添加剂可以根据细

胞种类提高神经干细胞的增殖。

供细胞培养使用

5 mL

Wako Cat. #	产品名称	级别 CAS No.	包装
016-21841	200 mmol/L L-丙氨酰-L-谷氨酰胺 Solution (×100) 200 mmol/L L-Alanyl-L-Glutamine Solution (×100)	供细胞培养使用	100 mL
073-05391	200mmol/L L-谷氨酰胺溶液（×100） 200 mmol/L L-Glutamine Solution (×100)	供细胞培养使用	100 mL
078-05525	G-MEM 含有 L-谷氨酰胺和酚红 G-MEM with L-Glutamine and Phenol Red	供细胞培养使用	500 mL
139-15651	MEM含非必需氨基酸溶液(×100) MEM Non-essential Amino Acids Solution (×100)	供细胞培养使用	100 mL
067-04031	人重组碱性成纤维细胞生长因子 Fibroblast Growth Factor (basic) Human, recombinant bFGF/FGF2无信号肽序列（147a.a.）。	供生物化学使用	25 µg
064-04541	人重组碱性成纤维细胞生长因子 Fibroblast Growth Factor (basic) Human, recombinant bFGF/FGFB有信号肽序列（156a.a.） [Takahashi, K., et al.: Cell, 131,861 (2007)]	供细胞生物学使用	50 µg
060-04543			100 µg
068-04544			1 mg

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

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人ES/iPS 细胞检测试剂盒 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit

StemSure® hPSC培养基△ 人ES/iPS细胞无饲养层无血清培养基

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 StemSure® Serum Replacement

ES/iPS细胞培养试剂

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