miRNA研究专题

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  FUJIFILM Wako提供miRNA从分离、克隆到靶基因功能研究的一系列试剂盒。

  列表中的产品仅仅用于实验室研究,不能作为药物、食物或人的使用。



◆简便高效的microRNA分离试剂盒——microRNA Isolation Kit

 

 产品编号:291-70201


  microRNA Isolation Kit 可同时分离出miRNA和及其靶基因mRNA,操作简单。分离得到的 Ago IP RNA fraction,可用于miRNA和靶基因mRNA的克隆、定量和表达谱分析。


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高效的miRNA克隆——microRNA Cloning Kit Wako

   

产品编号:290-66501


● 高效率克隆microRNA

● 可克隆具有二级结构的microRNA

● 重复性好。



miRNA靶基因mRNA的克隆—— Target mRNA Cloning Kit Wako

  

产品编号:298-68001


  miRbase中miRNA的数目已经达到10883,但是miRNA已知的靶序列mRNA却很少, 而miRNA的靶序列研究也是其功能研究一个重要部分,由于miRNA与其靶mRNA存在不完全配对,对计算机预测造成困难。

  miRNA、靶mRNA和Ago蛋白会以复合物RISC形式存在,本试剂盒通过从细胞中分离得到的RISC复合物中,直接有效的克隆特定miRNA的靶序列mRNA,可作为miRNA靶序列的新发现与筛选的有力工具。


特点


● 用于扩增微量 mRNA

● 可直接从Ago IP RNA片段中克隆mRNA,用于microRNA 靶基因的研究


靶序列mRNA的cDNA克隆实验路线图


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◆PCR反应的纯化试剂盒——PCR  Purification Kit Wako


产品编号:298-67901


  不需要使用凝胶试剂盒回收纯化,可通过PCR  Purification Kit Wako直接去除PCR扩增后DNA反应液中含有的引物、引物二聚体、dNTP、酶类如DNA聚合酶和限制内切酶等物质,操作简单,纯化后DNA溶液可用于限制酶处理、Southern杂交、标记,克隆,测序,体外转录等实验。


miRNA试剂盒(Wako)的应用(miR-122 targeted mRNA的研究)


实验总路线图


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① 扩增到cDNA电泳检测


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结果显示:可以从Ago IP RNA片段中成功的扩增到cDNA.

② 扩增后的cDNA的克隆

  

miR-122的潜在靶序列的cDNA克隆 ,然后通过在线软件如TargetScan 4.2对获得序列是否是靶序列进行评分。


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  ※ 1. CSP:Context Score Percentile

         靶序列mRNA的合理参数值

  ※ 2.对照细胞

        转染了GL3(荧光素酶)siRNA的HepG2细胞



③ 靶序列 mRNA 的鉴定( qRT-PCR)

  

mRNA的定量(CSP※1 of Clone ≧ 80)

其中ALDOA mRNA已经证实是miR-122的靶基因,此外,通过此方法发现了很多新的miR-122潜在的靶序列。


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Target mRNA Cloning Kit

A useful approach to total analysis of RISC-associated RNA

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298-67901 298-68001

参考文献


1.   Hayashida, Y., et al . A useful approach to total analysis of RISC-associated RNA., BMC Research Notes , 2, 169(2009)

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
298-68001 Target mRNA Cloning Kit Wako 10 次
291-70201 microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 10 次
292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 10 次
292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 10 次
297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 10 次
298-67901 PCR Purifi cation Kit Wako 30 次
290-66501 microRNA Cloning Kit Wako 8 次