ISOGEN II 总RNA及小RNA提取试剂

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ISOGEN IIISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

总RNA及小RNA提取试剂

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

 

  ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

离心后的沉淀       

    ISOGEN II 100 mL

  ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中提取总RNA和小RNA的试剂。本品是含有苯酚和胍的均匀液体,根据与细胞成分的相互作用,能一步分离RNA。

  使用旧产品(ISOGEN和ISOGEN-LS)需要添加氯仿,要进行液相分离,而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质之后,添加水, DNA、蛋白质、多糖类等沉淀(不溶化),进行离心分离后可以去除(右图)。用酒精沉淀、洗净、溶解上清液之后,能分离出高纯度的RNA。若配合ISOGENOME 使用,也能够跟ISOGEN一样从同一样本中提取DNA。

◆特点


  • 无需使用氯仿分离RNA

  • 相比旧产品(ISOGEN等),小RNA的提取率更高

  • 可以把高分子RNA(>200 bases)和小RNA(<200 bases)分离(也有不分离的方案)

  • 混入的DNA较少,提取的RNA可以直接使用RT-PCR和定量RT-PCR

  • 约一小时内可提取出RNA

◆用途

  从活体组织提取RNA等等



◆产品列表


ISOGEN   II 10 mL100 mL

产品

包装

保存条件

备注

ISOGEN II

1瓶

2~10°C

(阴暗处)

非医疗用剧毒物

外观:青色溶液

容器(塑料瓶)外配有袋子。



运输方法

  本品在室温下运输。产品到达后,在2~10℃条件下保存即可正常使用。

◆使用案例


操作流程

・除了本产品,根据需准备RNase free water、乙醇、4-溴甲氧基苯异丙醇。
・可使用聚丙烯管,使用前确认是否能够承受离心强度(12K × g)及ISOGEN II(苯酚)。
・离心操作建议在4-28℃进行。

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂



实验数据

1. 提取的RNA的电泳

2. 检验出miRNA
3. RT-PCR
4. RNA提取共沉淀剂效果(测定吸光度)
5. RNA取量的基准
6. 使用ISOGEN II从植物提取总RNA
7. 使用ISOGEN II从植物提取高分子RNA及小RNA分离<改变流程>

Data 1:提取的RNA的电泳

  

  按照ISOGEN及ISOGEN Ⅱ的操作顺序,提取RNA,进行电泳。


     琼脂糖凝胶电泳

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂


M: RNA Ladder (编号:311-06261)

 

道1:ISOGEN    提取 总RNA (2 μg)

道2:ISOGENⅡ 提取 总RNA (2 μg)

道3:ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (2 μg)

道4:ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.2 μg)

 

1.2% Agarose S (甲醛变性)

EtBr 染色

   聚丙烯酰胺凝胶电泳 

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂




道1:ISOGEN     提取 总RNA (5 μg)

道2:ISOGENⅡ 提取 总RNA (5 μg)

道3:ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (5 μg)

道4:ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.5 μg)

 

12% 聚丙烯酰胺凝胶 (Urea 变性)

EtBr 染色

  

  ▶ 道1、2中,ISOGENⅡ与ISOGEN一样,可提取全DNA。

  ▶ 道3、4中,ISOGENⅡ可区分200bases以上的高分子RNA及10~200bases的小RNA。



Data 2:检验miRNA

  对使用ISOGEN ISOGEN Ⅱ提取的总RNA进行3D-Gene Human miRNA Oligo chip分析

 ▶ ISOGEN Ⅱ比ISOGEN更能显示miRNA。

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

Data 3:RT-PCR


  使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ从Hela细胞提RNA作为模板。通过RT-PCR检测出β-actin基因。同时,进行不产生RT反应的控制组实验。


            

                 PCR条件

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

1:模板RNA量 500 ng

2:模板RNA量 100 ng

3:模板RNA量 20 ng

M:Gene Ladder 

(编号:316-06951)

  ▶ 使用ISOGEN Ⅱ提取的RNA比使用ISOGEN抽提的RNA混入DNA较少。

Data 4:RNA提取共沉淀剂效果(测定吸光度)

  ISOGEN Ⅱ的使用指南中分离小RNA时,对使用共沉淀剂Ethachinmate(Nippon Gene 产品编号:312-01791)或者Glycogen(和光纯药工业 产品编号:077-05311)时提取到小RNA情况进行了比较。



方法

  按照使用指南,从Hela细胞及小鼠肝脏回收小RNA,检测吸光度,计算小RNA的含量。将使用Ethachinmate提取到的数量看作1,在图表中列出了含量的相对值。

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

  ▶ 使用Glycogen作为共沉淀剂回收小RNA时的回收量较多,变异较少。

Data 5:RNA取量的基准

实验材料

高分子 RNA 的离析

总 RNA的离析

组织

肝脏

5~7 µg RNA/mg tissue

6~8 µg RNA/mg tissue

肾脏、脾脏

3~4 µg RNA/mg tissue

3~4 µg RNA/mg tissue

骨骼肌脑、肺

0.5~1.5 µg RNA/mg tissue

0.5~1.5 µg RNA/mg tissue

胎盘

1~3 µg RNA/mg tissue

1~3 µg RNA/mg tissue

培养细胞

上皮细胞

5~8 µg RNA/106 cells

5~10 µg RNA/106 cells

成纤维细胞

3~5 µg RNA/106 cells

4~6 µg RNA/106 cells

Data 6:使用ISOGEN II从植物提取总RNA

从植物抽提全RNA例子 (PDF 222KB)

Data 7:使用ISOGEN II从植物抽提高分子RNA及小RNA分离<变化流程>

从植物抽提高分子RNA及小RNA离析例子 (PDF 218KB)

◆注意事项

  • 本品是实验研究用的试剂,不能作为医药品或其他目的使用。另外,如果您对试剂的基本的知识不了解,请不要使用。

  • ISOGEN II是非医疗用剧毒物(苯酚制剂),请小心操作。

  • 使用时请穿着适当的防护设备(手套、眼镜等)。

  • 操作场所保持通风,以免吸入蒸汽。

  • 如果接触皮肤或眼睛,请用大量的水冲洗15分钟或以上,并及时就诊。

  • 请按照说明书进行操作。

  • 对于因不按照说明书操作而导致的事故,Nippon Gene不负任何责任。

◆备注

  本产品是实验研究用试剂,请勿用作医疗用途。



◆资料 Data Sheet


产品说明书

  • ISOGEN II 产品说明书第三版(100 mL产品小冊子) (PDF 195KB)

  • (内容与册子相同) (PDF 168KB)

SDS(Safety Data Sheet)

  • ISOGEN II  安全数据图表(PDF)

宣传单

  • 册子(PDF 2MB)

◆相关产品

   • RNA抽提用试剂 ISOGEN、ISOGEN-LS

   • RNA抽提用试剂 ISOGEN with Spin Column

   • 酒精沉淀用共沉淀剂 Ethachinmate

   • 缓冲器 ddWater, TE(pH 8.0)


Q:可以从全血等血液样本中抽提RNA吗?

A:ISOGEN II 难以提取出高纯度的RNA,建议使用ISOGEN-LS。


Q:可以提取DNA或蛋白质吗?

A:旧法使用 ISOGEN,可以从同一样本回收DNA及蛋白质,但由于此次研发的是提取RNA的方法,ISOGEN II 中混入的DNA较少,无法提取DNA

     及蛋白质。不过,配合使用DNA提取试剂 ISOGENOME,可回收DNA样本。

参考文献


[ 1 ]


Chomczynski, P. : Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending.

[ 2 ]


Chomczynski, P. and Sacchi, N.:”Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroform extraction”, Anal. Biochem,162, 156-159(1987)


[ 3 ]


Chomczynski, P.:”A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques,15, 532-537(1993)


[ 4 ]


Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.:”Effect of pH and ionic strength on the spectrophotometric assessment of nucleic acid purity”,Biotechniques, 22, 474-481(1997)


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
317-07363 ISOGEN II 10 mL
311-07361 ISOGEN II 100 mL