ISOGEN PB Kit(从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒)

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      315-06421

    ISOGEN PB Kit

    从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒

     

          ISOGEN PB Kit(从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

                             ISOGEN PB Kit 20次用量

     

      ISOGEN PB Kit 用于从石蜡包埋组织切片提取RNA。

      脱石蜡后,从经Proteinase K 处理过的组织用ISOGEN-LS提取RNA只需2 小时左右。提取出的RNA可用于RT-PCR。

     

    ◆特点

     

      • 从石蜡包埋组织切片提取RNA

      • 操作简便,且用时少(2小时)

      • 提取的RNA可用于RT-PCR

     

     

    ◆用途

     

     

      • RT-PCR 检测RNA 病毒

      • RT-PCR 检测mRNA

      • 检测石蜡包埋组织切片的RNA 保存度等

     

     

    ◆产品内容

     

     

    产品

    包装

    备注

    Proteinase K(20 mg/ml)

    100 µl x 1

     

    Extraction Buffer

    3 ml x 1

    可室温保存
    Extraction Buffer 可能出现白色结晶,非质量问题。在37~50°C条件下,孵化后,结晶完全溶解后使用。

    ISOGEN-LS

    10 ml x 1

    非医疗用剧毒物

    可冷藏保存(2~10°C)

    Ethachinmate

    60 µl x 1

    可冷藏保存(2~10°C)

    Deoxyribonuclease(RT Grade)

    20 µl x 1

     

    10X DNase(RT Grade)Buffer II

    100 µl x 1

     

    Stop Solution(RT Grade)

    100 µl x 1

     

    DEPC treated Water

    500 µl x 2

    可室温保存

     

    保存方法

     

      冷冻保存(-20°C)

    试剂盒以外必需的试剂

     

      • Lemosol® 或Lemosol® A

      • 乙醇

      • 氯仿

      • 异丙醇

     

     

    ◆使用实例

     

     

    操作前需知

     

      从石蜡包埋组织提取RNA时, RNA的分解持续到包埋过程,其RNA的完整性比从新鲜组织提取的RNA低。

       从哺乳动物的新鲜组织提取的total RNA经过电泳后,检测出明亮的28S rRNA和18S rRNA条带,其比例约为2 : 1。使用石蜡包埋组织进行提取时,无法得出这个结果。实际上,使用小鼠的石蜡包埋组织进行提取实验,几乎无法检测28S rRNA。因此,在包埋过程中引导RNA分解。石蜡包埋状态关系到RNA的分解程度。有可检测出18S rRNA的石蜡块,也有18S rRNA降解太多而无法检测出来。Nippon Gene将判断基准设定为剩余一个18S rRNA,in situ hybridization等、需要高保存度RNA时,建议设定标准。

      即使RNA已分解(包括无法确认18S rRNA的情况),可使用RT-PCR检测出基因,使用RT-PCR时,RNA的完整性较好。但是使用石蜡包埋组织切片进行PCR时,扩增效率比一般情况 的低,请注意避免引物长度设置过大(400 bp以下,尽量设置为200 bp以下)。

     

     

    操作流程

     

         ISOGEN PB Kit(从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

     

    操作实例1 从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取RNA 

     

      按照操作流程,从410 µm鼠颌下腺石蜡包埋组织切片,提取RNA ,取1/4 量(5 µl,使用1% 福尔马林変性Agarose S 进行电泳。

     

      ISOGEN PB Kit(从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

     

     

    操作实例2 RT-PCR检测小鼠Gapd基因

     

     

    从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取500 ng RNA, DNase 处理后,进行RT-PCR,检测出小鼠glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(Gapd)基因外显子5(258 bp)。

     

     

       ISOGEN PB Kit(从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

     

     

     

       ISOGEN PB Kit(从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

     

     

    关于微量样本RT-PCR

     

      对于无法得到提取RNA的电泳结果或10 ng 以下的情况,建议添加RT反应補助试剂RTmate,进行逆转录。

    ISOGEN PB Kit(从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒)(和光纯药工业株式会社)

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