SPiDER-βGal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达

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      343-0916

    利用活细胞分析lacZ报告基因的表达SPiDER-βGal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达(和光纯药工业株式会社)

    SPiDER-βGal

     

       SPiDER-βGal是检测具有细胞膜透过性及细胞内滞留性β-galactosidase的新型试剂。SPiDER-βGal具有较高的细胞膜透过 性,因此可使用活细胞分析分析lacZ报告基因的表达。色素保留在细胞内,不会向外流出。因而,可进行单细胞层面的高灵敏度成像。

     

                   

    ◆原理

     

      SPiDER-βGal与β-galactosidase发生反应,生成名为quinone methide(醌甲基化物)的中间体,与附近的蛋白质中的亲核基团(SH基等)结合,形成稳定的共价键,从而具备荧光性质。

      反应后的色素被固定在细胞内的蛋白质,滞留在胞内,可在单个细胞层面检测β-galactosidase表达细胞。

     

    SPiDER-βGal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达(和光纯药工业株式会社)

     SPiDER-βGal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达(和光纯药工业株式会社)

     

    ◆特点

     

      ● 可使用活细胞或组织进行单个细胞层面的表达细胞荧光成像,亦可使用X-gal等固定细胞

      ● 为探测物不向外流出,使用比以往更高灵敏度的β-galactosidase的荧光探针进行检测

     

    SPiDER-βGal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达(和光纯药工业株式会社)

                               β-galactosidase稳定细胞系HEK/lacZ 细胞(活细胞)的染色实例

                           黄色 : SPiDER-βGal    蓝色 : Hoechst 33342(※lacZ 表达细胞与未表达细胞以1 : 1比例混合)

     

     

     

    ◆利用SPiDER-βGal检测β-galactosidase

     

      SPiDER-βgal可对固定细胞及活细胞进行染色,即使染色后进行固定化,也不会对色图产生影响。

     

     

    SPiDER-βGal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达(和光纯药工业株式会社)

     

     

    ◆固定化对染色的影响

     

      细胞固定化会使GFP的荧光强度下降。但是,使用SPiDER-βgal进行染色,即使是固定细胞也具有较强的荧光性。

     

    SPiDER-βGal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达(和光纯药工业株式会社)

      利用GFP-lacZ 融合质粒DNA,同时表达GFP及β-galactosidase的HeLa细胞的荧光色图

     

    ◆案例分析

     

    果蝇组织的Live成像

     

    SPiDER-βGal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达(和光纯药工业株式会社)

     

     

      用10 μmol/l SPiDER-βGal 和16 μmol/l Hoechst 33342对未固定的果蝇组织染色20-30分钟,共聚焦显微镜观察。
      黄色:SPiDER-βGal
      蓝色:Hoechst 33342

      利用SPiDER-βGal在细胞内的高保留性,完全不会渗出到邻近细胞;只对β-galactosidase(β-半乳糖苷酶)表达细胞进行单细胞层面染色。

     

     

    老化细胞染色实例

     

      利用H2O2老化诱导WI-38细胞的荧光显微镜及流式细胞仪分析

     

       荧光显微镜下,通过SPiDER-βGal的荧光可以清晰观察到老化诱导的活细胞中SAβ-Gal表达显著。

      ● 与其他细胞老化标记相关的结果

      ● 流式细胞仪中,可以通过SPiDER-βGal荧光强度的变化来确认老化诱导的SAβ-Gal表达的增加。(右图)

     

     SPiDER-βGal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达(和光纯药工业株式会社)

     

    产品编号 产品名称 产品规格
    343-09161 SPiDER-βGal 20μg×3
     
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