细胞融合试剂Cosmo细胞融合试剂E仙台病毒包膜细胞融合试剂-细胞培养用试剂

Cosmo细胞融合试剂-EX仙台病毒包膜细胞融合试剂
GenomONETM-CF含有仙台病毒包膜和专用缓冲液,可促使细胞融合。适用于贴壁或者悬浮状态的任何细胞。仅仅需要30分钟就可完成融合细胞及制造混合动力的操作。

Cosmo细胞融合试剂-EX仙台病毒包膜细胞融合试剂

GenomONETM-CF EX 仙台病毒包膜细胞融合试剂 

细胞融合试剂Cosmo细胞融合试剂E仙台病毒包膜细胞融合试剂-细胞培养用试剂

  GenomONETM-CF含有仙台病毒包膜和专用缓冲液,可促使细胞融合。适用于贴壁或者悬浮状态的任何细胞。仅仅需要30分钟就可完成融合细胞及制造混合动力的操作。

◆用途

  ●肿瘤疫苗·癌症免疫研究

   癌细胞和树突细胞融合等

  再生医疗·细胞治疗研究

   脏器来源细胞和干细胞融合等

  单克隆抗体的制备

   抗原B细胞和髓过氧化物酶细胞融合

  分生·分化·育种研究

   对脱核未受精卵的核移植(核置换)

  其他

   PEG&电融合的使用介绍

HVJ Envelope(HVJ-E):

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  HVJ包膜(HVJ-E)是完全灭活和纯化仙台病毒(HVJ*),即只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的唾液酸受体结合,通过F蛋白的作用,引起细胞膜融合。在HVJ-E中,仙台病毒的基因组RNA已经完全失活,在人类和实验动物体内不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和设备,它可以安全地在普通的实验室使用。

*HVJ:日本仙台病毒

HVJ-E细胞融合原理

在低温(0 – 8℃)条件下,每一个细胞与数百个以上的HVJ – E接触,HVJ – E与细胞膜上的唾液酸受体结合,通过细胞表面吸附(步骤1),细胞通过HVJ-E相互连接(步骤2),形成细胞彼此聚集的状态。当该细胞/ HVJ-E的复合物加热到37℃时,细胞膜干扰就会进一步扩大,细胞膜内膜结构也暂时改变。这种变化是短暂的,随后会立即返回到正常结构,但是在这个期间,细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合(步骤3)。

步骤一

步骤二

步骤三

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应用方法

 

悬浮法

电镀法

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悬浮细胞融合案例

同种细胞融合
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异种细胞融合

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  荧光标记的红(* 1)细胞和绿色荧光标记(* 2)细胞(每1.0х105个)在融合缓冲液50μL混合后,加入HVJ-E冰敷5分钟,随后37℃下反应15分钟后,融合细胞(黄色)进行了观察。

黏着态和悬浮态细胞融合案例

在粘合状态BHK-21(红)和在浮动状态(绿色)的P19细胞的融合

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胶粘状态的HeLa S3(红)在浮动状态(绿色)的P19细胞的融合

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  荧光标记的(* 1)中的红,附着的细胞在12孔平板,绿色荧光标记(* 2)中,添加预先准备的HVJ-E,来处理漂浮细胞1×105个的悬浮液(融合缓冲污染),并在室温下离心(1000转),每个板5分钟。随后孵育37℃15分钟后,更换增殖用的培养基继续细胞培养。观察3个小时后的融合细胞(黄色)。

和PEG法的比较

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  红色荧光标志(* 1)的ratMSC(骨髓由来老鼠间叶系细胞)和绿色荧光标识的老鼠原代培养心肌细胞2×105个融合缓冲液50μL中混合后,添加HVJ – E,冰浴5分钟,然后37℃孵育反应15分钟,观察融合细胞(黄色)。1 – 2日培养后,观察到粘着的融合细胞。在PEG法中融合紧接之后细胞毒性强烈,融合细胞的数量很少。

◆安全性说明

HVJ-E失活的确认(确认无感染性病毒的存在)

1、

细胞增值实验(荧光灶单元(FFU)法)

处理LLC-MK2细胞,一到两天后,病毒生长性的HVJ融合蛋白F抗体通过荧光抗体法测定,已证实未检测到病毒蛋白。<制造阶段实验>

2、

受精卵生长试验(血凝单位测定)

处理受精卵,3天后的病毒增殖,包括在HVJ表面的HN蛋白的红血细胞聚合活性(HAU)测量作为指标,已经证实,没有看到病毒的生长。<制造阶段实验>

3、

小鼠感染性研究

鼻腔给药小鼠和未处理小鼠(SIX周)在相同笼中饲养,通过测定血清中的抗HVJ抗体滴度进行了个体之间感染性的检测。其结果是,在非给药的情况下未观察到抗体滴度增加,表明未感染HVJ-E。

4、

动物个体的遗传基因导入实验

小鼠、大鼠等实验动物的各种药物实验(肺、气管、肝和静脉等)。已证实完全没有病毒感染或是可疑的事例。

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Honma   R, Fujii Y, Ogasawara S, et al. Establishment of Novel Monoclonal Antibody   PMab-32 Against Rabbit Podoplanin[J]. Monoclonal antibodies in   immunodiagnosis and immunotherapy, 2016, 35(1): 41-47. Abstract
Ninomiya   K, Yamashita T, Tanabe Y, et al. Targeted and ultrasound-triggered cancer   cell injury using perfluorocarbon emulsion-loaded liposomes endowed with   cancer cell-targeting and fusogenic capabilities[J]. Ultrasonics   sonochemistry, 2016, 28: 54-61. Abstract
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Quijada   P, Salunga H T, Hariharan N, et al. Cardiac stem cell hybrids enhance   myocardial repair[J]. Circulation research, 2015, 117(8): 695-706. Abstract
Kaneko   M K, Oki H, Hozumi Y, et al. Monoclonal antibody LpMab-9 recognizes   O-glycosylated N-terminus of human podoplanin[J]. Monoclonal antibodies in   immunodiagnosis and immunotherapy, 2015, 34(5): 310-317. Abstract
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Takahashi   Y, Tomotsune D, Takizawa S, et al. New model for cardiomyocyte sheet   transplantation using a virus-cell fusion technique[J]. World journal of stem   cells, 2015, 7(5): 883. Abstract

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
ISK-CF-001-EX GenomONE™ -CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents
GenomONETM-CF EX 仙台病毒包膜(1只装)细胞融合试剂 
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