生物组织脂肪含量测定和去除


生物组织脂肪含量测定和去除

生物组织脂肪含量测定和去除


◆生物组织脂肪含量测定和去除


提取脂肪前烧瓶称重

提取液转移至此烧瓶旋转浓缩近干后移至N2流下将多余溶剂吹走,直至天平称重无变化(百分位天平)

称量提取后烧瓶重

两次重量差即为脂肪

脂肪含量=【(提取后烧瓶重-提取前烧瓶重)/提取样】×(1-组织水分百分含量)

称脂后加50mLHexane溶解提取物

15g酸性硅胶,搅拌磁子

搅拌30mins

过无水Na2SO4小柱

5mLHexane清洗两次

合并收集后浓缩

 


楼上氧化铝0.8 cmID,细柱,半湿法装柱

若是1.0cmID,则Al2O3用10g

柱中加30mLHexane

8g Al2O3

1cm Na2SO4

预淋洗(30mL-40mLHexane洗脱)

上样

DCM/Hexane=5:95 100mL洗脱PCBs

DCM/Hexane=1:1  50mL洗脱dioxins

◆凝胶渗透色谱 GPC

填料: Bio-Beads  SX3

GPC 柱型 30cm×25mmID(柱子下面有砂芯)


填料 30g于烧杯中

加入DCM:Hexane(1:1,V:V)全部盖住

铝箔纸盖住烧杯置于通风橱过夜,至少12hrs,填料充分溶胀

搅动填料,并用吸管逐步将填料转移到柱中,中间打开四氟阀放去多余的溶剂

全部转移后,上部留有10cm溶剂

上端加塞,底部关阀

整个柱子倒置后打开阀门

振荡柱体,使填料逐渐整体均匀倒置

关闭阀门,将柱子缓慢扶正,并且打开上面的磨口塞,可以看到填料均匀沉降直至完全

应该无断层,无气泡,无沉降分界层

500mL DCM:Hexane(1:1 ,V:V)淋洗,(注意要将溶剂混合均匀)

滴速 2-3滴/S

不用时关阀加塞密闭,上层留有5CM以上的溶剂,GPC使用溶剂均为DCM:

Hexane(1:1,V:V)若长时间没用,纯化前用100mL溶剂预淋洗

 


◆GPC洗脱

 

DCM:Hexane(1:1,V:V)

100mL 预淋洗(量筒接)量筒1

上样后,先用50 mL DCM:Hexane(1:1,V:V)去掉大分子(量筒接)量筒2

另外量筒接70mL(DCM/Hexane=1/1)为PCB 量筒3

另外量筒接50mL,量筒4

量筒4与量筒2  50mL合并保存,以防重复实验时回收再分析

 

注意:

1.若GPC柱中物料层有气泡,则上面用塞子堵上,稍微晃一下柱子可以去除。若溶剂干了会造成断层。

2.GPC柱用前由于重心作用,上层发胀,所以需要释放一段洗脱溶剂,将发胀部分压下去,再上样。

 

◆N2

 

纯化后样品旋转蒸发

转移入KD管后N2

剩下0.2-0.3mL左右

进样小瓶瓶芯中加15uL的壬烷

Kd管中样品转移至瓶芯

N2吹(温度不要太高30℃-60℃,太高有损失)

洗KD管用DCM or Hexane至少洗2次,合并到进样小瓶瓶芯中

N2吹至瓶芯拐弯处上1mm-2mm处

加入回收标保证进样小瓶中最后溶液约为20µL左右

涡轮

 

注意 :进样小瓶与瓶芯大小要搭配

    加标前标准溶液需要提前从冰箱中拿出来平衡大约10几分钟

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