ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品
StemSure® Serum Replacement

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ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

StemSure® Serum Replacement

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

  本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子,会导致干细胞分化。使用本产品代替血清,可在ES和iPS细胞培养的同时,保持他们的未分化状态,达到稳定培养。
  本产品不含剧毒物质,将其作为普通物质处理。
  使用本产品配制培养基培养的小鼠ES细胞,可用于制备嵌合体小鼠,并确认其种系传递。

 





◆特点•优势

  ● 可用于嵌合体小鼠制备,并确认其种系传递。

  ● 作为血清替代品,用于小鼠ES细胞・人IPS细胞培养。

  ● 不含剧毒物质。

 

◆案例•应用


1、嵌合体小鼠的制备与种系传递Update!!


  将组装HaloTag® cDNA的目标载体导入小鼠ES细胞,用含有StemSure®  Serum Replacement(SSR)的培养基培养。确认载体导入小鼠ES细胞后,将其注入至ICR小鼠的胚盘胞,并移植至ICR小鼠的子宫。得到的嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配,获得F1小鼠。

 


(1)  嵌合体小鼠


  收集嵌合体小鼠的血液,用TRITC(四甲基若丹明异硫氰酸盐)对HaloTag® 蛋白质染色。发现小鼠ES细胞源的HaloTag® 的血液被染色,可确认为嵌合化。

    

      ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品



(2) F1小鼠



  F1小鼠的血液发现HaloTag® 存在,可确认用SSR培养基培养的ES细胞嵌合小鼠能够正常存活。


ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品




2、人iPS细胞201B7的培养


(1) 克隆形态与ALP染色 


  已确认可用StemSure®Serum Replacement(SSR)培养人iPS细胞201B7株。ALP染色呈阳性。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

  <培养基组成>
  D-MEM/Ham's F-12 + 20% SSR + 2mmol/l L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5ng/ml bFGF

 


(2) 未分化标记的发现


  使用StemSure®Serum Replacement(SSR)培养的人iPS细胞201B7株,确认各种未分化标记(Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81)呈阳性。


ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品


 


3、小鼠ES细胞D3的培养


(1) 细胞形态与ALP染色


  使用StemSure®Serum Replacement(SSR)培养小鼠ES细胞D3,能观察到小鼠ES细胞群特有的光泽,ALP染色呈阳性。


ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品 



(2) 细胞增殖曲线


  用不同培养基培养小鼠ES细胞D3进行14继代培养,比较细胞增殖。

  如下图所示StemSure® 系列与A公司有同等的性能。


ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

  < StemSure® 系列培养基组成>
  StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/lStemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

  (使用胶原包被的12孔板)

 

(3) 细胞群倍加数*

  使用不同培养基对小鼠ES细胞D3进行继代培养,检查培养天数与细胞群倍加数的关系。

  下图显示StemSure® 系列与A公司产品的细胞群倍加数相同。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

  *细胞群倍加数 cell population doubling level,缩写PDL,指从培养开始至现在细胞群的倍增次数。

  <培养基组成>

  StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

  (使用胶原包被的12孔板)

 


(4) 未分化标记的检测


  使用StemSure® 系列对小鼠ES细胞D3进行5代继代培养,各种未分化标记(Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1)呈阳性。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

  <培养基组成>
  StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

 


4、畸形瘤的形成


  用StemSure® 系列对小鼠ES细胞D3进行继代培养。对免疫不全小鼠的皮下注射培养后细胞。在形成皮下畸形瘤,其内部检测出神经组织(外胚叶源)、软骨组织(中胚叶源)、管腔结构纤毛上皮(内胚叶源)。

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

  <培养基組成 >
  StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

★StemSure® 系列★


  StemSure® 系列可培养ES细胞和iPS細胞。使用小鼠ES细胞D3检测每批产品的品质。


  ● StemSure® D-MEM・巯基乙醇,硫代甘油

  ● StemSure® 明胶溶液

  ● StemSure® LIF, 小鼠, 重组. 溶液,

  ● StemSure® 冻存溶液

品编号

产品名称

等 级

规 格

价格

保存温度法规情报

197-16275

 StemSure® D-MEM(High Glucose)with Phenol 
   Red and Sodium Pyruvate

细胞培养用

500ml

询价

198-15781

 StemSure® 10mmol/l   2-Mercaptoethanol Solution 
   (×100)

细胞培养用

100ml

询价

195-15791

 StemSure® 50mmol/l   Monothioglycerol Solution 
   (×100)
    与2ME同等使用的还原剂。不属于毒物。

细胞培养用

100ml

询价

190-15805

 StemSure® 0.1w/v%   Gelatin Solution

细胞培养用

500ml

询价

199-16051
195-16053

 StemSure® LIF,   Mouse, recombinant, Solution

细胞培养用

106units

106units×10

询价

195-16031

 StemSure® Freezing   Medium

细胞培养用

100ml

询价

已有案例引用的培养基配方


iPSC培养基组成如下:含15%StemSure  Serum Replacement(197-16775; Wako Pure Chemical Industries) DMEM /  F12,1%抗生素 – 抗真菌混合溶液,1%非必需氨基酸(139-15651; Wako Pure Chemical Industries ),2mM谷氨酸(16948-004; Nacalai Tesque)和0.1mMβ-巯基乙醇(21438-82; Nacalai Tesque)。文献全文请点击参考文献。

Katayama M, Hirayama T, Horie K, et al. Induced Pluripotent Stem Cells With Six Reprogramming Factors From Prairie Vole, Which Is an Animal Model for Social Behaviors[J]. Cell transplantation, 2016, 25(5): 783-796. 摘要

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
191-18375 Stemsure® Serum Replacement
 Stemsure®血清替代品
500ml 细胞培养用